Введение
Глава 1. Материалы и методы
1. Материалы 49
2. Методы 53
2.1. Идентификация бактерий 53
2.2. Методы исследования бактериальной адгезии
2.2.1. Тест агрегации дрожжей 53
2.2.2. Тест «исследование адгезии к иммобилизированным субстратам» (Growth assay) 53
2.2.3. Обогащение культур микроорганизмов клетками, экспрессирующими пили I типа 54
2.2.4.Радионуклвидное исследование адгезии 54
2.2.5. Формалинизация эритроцитов 55
2.2.6. Исследование адгезии к эритроцитам 55
2.2.7. Исследование адгезии микроорганизмов к клеткам защечного эпителия 56
2.2.8. Исследование связывание протеина FimH с пероксидазой хрена 57
2.2.9. Обработка ферментами ASG и РРО 57
2.2.10. Обработка НИЛ И 57
2.3. Определение антагонистической активности методом отсроченного антагонизма 57
2.4. Моделирование дисбактериоза у животных 58
2.5. Исследование транслокации кишечной флоры в органы и ткани 59
2.6. Методы работы с ДНК 59
2.6.1. Выделение плазмидной ДНК 59
2.6.2. Обработка ДНК 60
2.6.3. Методы введения генетического материала в клетку 61
2.6.3.1. Кальциевая трансформация 61
2.6.3.2. Конъюгация и мобилизация 62
2.7. Оценка продукции колицина и чувствительности бактерий к его действию 2.7.1. Тест с верхним агаром 62
2.8. Методы статистической обработки результатов исследований 63
Глава 2. Получение генноинженерных вариантов штамма E.coli М17
2.1. Конструирование плазмид ColAmob и pCollacZ 64
2.2. Получение штаммов E.coli М17/ pCollacZ, E.coli М17/ ColAmob, E.coli M17 fimH::npt/pCollacZ, E.coli M17 fimH::npt/pColAmob 69
Глава 3. STRONG Антагонистическая активность нормальной микрофлоры по отношению к
патогенным Escherichia coli STRONG 71
Глава 4. Сравнительное исследование адгезивной активности различных групп пробиотиков 76
Глава 5. Исследование влияния на уровень адгезии различных штаммов E.coli физико-химических факторов 81
5.1. Влияние низкочастотного инфракрасного лазерного излучение на уровень адгезии патогенных E.coli к различным субстратам 81
5.1.1. Исследование влияния НИЛИ на уровень жизнеспособности E.coli 81
5.1.2. Влияние НИЛИ на уровень адгезии патогенных E.coli к эритроцитам...82
5.1.3. Изменение адгезии патогенных E.coli под влиянием обработки НИЛИ эритроцитов 84
5.1.4. Влияние НИЛИ на уровень адгезии патогенных E.coli к клеткам защечного эпителия 84
5.2. Влияние обработки ферментами L-Аспарагиназой и Полифенол оксидазой на уровень адгезии E.coli к различным субстратам 85
5.2.1. Определение бактерицидных свойств ферментов ASG и РРО 85
5.2.2. Определение эффективной антиадгезивной концентрации ASG и РРО.86
5.2.3. Исследование влияния ферментов L-Аспарагиназы и Полифенол оксида-зы на адгезию патогенных E.coli к эритроцитам 88
5.2.4. Исследование влияния ферментов ASG и РРО на адгезию патогенных E.coli к клеткам защечного эпителия 88
5.2.5. Исследование влияния ферментов ASG и РРО на адгезию E.coli в опытах "Исследования адгезии к иммобилизированным субстратам" и "радионуклеидном исследовании адгезии" 89
5.2.6. Исследование влияния ASG и РРО на величину связывания очищенного протеина FimH с пероксидазой хрена в реакции ELISA 92
5.3. Влияние комплексной обработки НИЛИ и ферментами ASG и РРО на уровень адгезии E.coli 93
5.4. Влияние НИЛИ и ферментов РРО и ASG на адгезивную активность пробио-тиков 98
Глава 6. Исследование защитного действия пробиотиков на модели in vivo
6.1. Отработка модели дисбактериоза на мышах 98
6.2. Моделирование инфекционного процесса, вызванного E.coli
0157:Н7 102
6.3. Использование пробиотиков для профилактики и лечения инфекции, вызванной E.coli 0157:Н7 103
Заключение 107
Список литературы
