Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1. Грибы белой гнили. Характеристика субстрата 8
1.1.1. Особенности строения лигнина - природного субстрата грибов белой гнили 8
1.1.2. Общая характеристика лигнинразрушающих грибов 11
1.1.3. Факторы, влияющие на селективность деградации лигнина 12
1.2. Общая характеристика ферментов лигнолитической системы 16
1.2.1. Лигниназа 17
1.2.2. Мп-пероксидаза 18
1.2.3. Лакказа 20
1.3. Физиологические функции ферментов лигнолитической системы 23
1.4. Биосинтез ароматических соединений грибами, возбудителями белой гнили 28
1.5. Образование гуминовых веществ в природе. Гуминоподобные вещества грибов предшественники гуминовых кислот 34
Глава 2. Материалы и методы 45
2.1. Материалы и объекты исследования 45
2.2. Жидкофазное культивирование Cerrena maxima и Coriolus hirsutus 46
2.2.1. Поверхностное культивирование Cerrena maxima и Coriolus hirsutus 46
2.2.2. Глубинное культивирование Cerrena maxima и Coriolus hirsutus 47
2.3. Твердофазное культивирование индивидуальных штаммов Cerrena maxima и Coriolus hirsutus и их совместное культивирование на природном лигнинсодержащем субстрате - овсяной соломе 47
2.3.1. Изучение совместимости Cerrena maxima и Coriolus hirsutus при культивировании 47
2.3.2. Совместное и раздельное твердофазное культивирование данных штаммов 48
2.4. Очистка лакказы и Mn-пероксидазы Cerrena maxima 48
2.5. Методы определения активности лигнолитических ферментов 49
2.6. Определение биохимических и кинетических характеристик лакказы и Mn-пероксидазы Cerrena maxima 50
2.7. Выделение и очистка ГПВ грибов белой гнили 53
2.8. Синтез ГПВ in vitro с помощью лакказы С. maxima 54
2.9. Определение основных количественных и качественных хапактеоистик ГПВ 54
2.9.1. Элементный анализ 54
2.9.2. Определение молекулярных масс ГПВ методом эксклюзионной хроматографии 55
2.9.3. Спектрофотометрическии и ИК - спектроскопический анализ ГПВ...55
2.9.4. 13СЯМР спектроскопия препаратов ГПВ 55
2.10. Методы определения содержания основных компонентов растительного сырья 57
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение 59
3.1. Скрининг культуры Cerrena maxima 59
3.2. Культивирование и биосинтез лигнолитических ферментов базидиомицета Cer. maxima 61
3.3. Выделение, очистка и изучение лакказы и Мп-зависимой пероксидазы Cer. maxima 67
3.3.1. Выделение и очистка лакказы и Мп-зависимой пероксидазы 67
3.3.2. Характеристика физико-химических свойств лакказы Cer. maxima 69
3.3.3. Характеристика физико-химических свойств Мп- пероксидазы Cer. maxima 78
3.3.4. Субстратная специфичность лакказы и Мп-пероксидазы Сег. maxima 84
3.4. Изучение роли лакказы и Мп-пероксидазы Сег. Maxima в процессе деградации лигнина на природных лигноцеллюлозных субстратах 87
3.5. Структурная характеристика и исследование роли лигнолитического комплекса в биосинтезе ГПВ 97
3.5.1. Получение ГПВ 97
3.5.2. Структурная характеристика ГПВ 101
Выводы 115
Список цитируемой литературы 117
