Введение
1. Обзор литературы
1.1. Краткая характеристика бактерий рода Azospirillum 19
1.2. Свойства и функции бактериальныхлектинов
1.2.1. Современные представления о пектинах 24
1.2.2. Пили (фимбрии), лектины энтеробактерий 28
1.2.3. Фимбрии, агглютинины, лектины азотфиксирующих бактерий 45
1.3. Роль лектинов в проблемах специфичности и молекулярных механизмах взаимодействия азотфиксирующих бактерий с корнями растений 59
2. Материалы и методы исследования
2.1. Штаммы микроорганизмов и среды, используемые для их культивирования. 65
2.2. Методы исследования 66
2.2.1. Реакция гемагглютинации 66
2.2.2. Определение углеводной специфичности 67
2.2.3. Гель-фильтрация 67
2.2.4. Электрофорез в полиакриламидном геле 67
2.2.5. Изучение влияния протеаз и ионов двухвалентных металлов на активность лектинов 68
2.2.6. Анализ аминокислотного состава 68
2.2.7. Определение углеводного состава 68
2.2.8. Получение антител к лектинам
2.2.9. Установление локализации лектинов 70
2.2.10. Оценка адгезивных свойств бактериальных клеток на модели эритроцитов 71
2.2.11. Получение мутанта , brasilense Sp7 по лектиновой активности 72
2.2.12. Выделение полисахаридсодержащих соединений с поверхности азоспирилл 74
2.2.13. Количественная оценка образования бактериальных агрегатов 75
2.2.14. Выявление бактерицидной и фунгицидной активности лектинов 75
2.2.15. Получение фракций корней проростков пшеницы 76
2.2.16. Метод иммунодота 76
2.2.17. Изучение адгезии бактерий к корням растений 77
2.2.18. Получение гистологических препаратов корней проростков пшеницы и лука 78
2.2.19. Реакция бласттрансформации лимфоцитов 79
2.2.20. Определение противоопухолевого действия лектина 80
2.2.21. Цитологические и иммуноморфологические реакции иммунокомпетентных клеток мезентериальных лимфатических узлов 80
2.2.22. Исследование взаимодействий лектинов с компонентами плазмы крови и мембран эритроцитов 81
3. Результаты и обсуждение
3.1. Выделение, свойства и локализация лектинов азоспирилл 82
3.1.1. Скрининг бактерий рода азоспирилл на присутствие лектинов на поверхности клеток 82
3.1.2. Выделение и очистка лектинов 87
3.1.3. Характеристика лектинов азоспирилл 90
3.1.4. Определение локализации лектинов на поверхности клетки 104
3.2. Зависимость лектиновойактивности от условий выращивания бактерий 107
3.2.1. Оптимизация условий культивирования A. lipoferum 59b и A. brasilense Sp7, связанных с их лектиновой активностью 107
3.2.2. Воздействие неблагоприятных факторов на лектиновую активность A brasilense Sp7 и A. lipoferum 59b 131
3.2.3. Зависимость лектиновой активности азоспирилл от количества азотсодержащих веществ в среде культивирования 137
3.2.4. Связь адгезивных свойств бактерий с активностью лектинов на модели эритроцитов 148
3.3. Получение и характеристика мутанта A. Brasilense Sp7 по лектиновой активности 151
3.4. Значение лектинов азоспирилл в микробных ассоциациях 156
3.4.1.Изучение участия лектинов азоспирилл в агрегации бактерий 156
3.4.2. Определение возможной бактерицидной и фунгицидной активности лектина A brasilense Sp7 167
3.5. Роль лектинов азоспирилл в процессе взаимодействия с растениями 173
3.5.1. Роль лектинов в адгезии азоспирилл на корнях растений 173
3.5.2. Взаимодействие лектинов азоспирилл с компонентами корней пшеницы 178
3.5.3. Влияние лектинов азоспирилл на способность семян к прорастанию 185
3.6. Действие лектинов в отношении некоторых гидролитических ферментов 193
3.6.1. Влияние лектинов азоспирилл на активность гетерогенной Р-глюкозидазы 194
3.6.2. Изучение а, 3-глюкозидазной и {З-галактозидазной активностей на разных этапах выделения и очистки лектинов 200
3.7 Медико-биологические свойства лектинов 204
3.7.1. Митогенная активность лектина A. brasilense Sp7 204
3.7.2. Противоопухолевое действие лектина A brasilense Sp7 215
3.7.3. Влияние лектина A. brasilense Sp7 на кинетику клеточных популяций мезентериальных лимфатических узлов и динамику цитокинового статуса in vivo 218
3.7.4. Взаимодействие лектинов с компонентами плазмы крови и мембран эритроцитов 227
3.8. Некоторые биотехнологические а спекты получения бактериальных лектинов 244
Заключение 249
Выводы 260
Литература
