Введение
I. ЛИПАЗА: СТРОЕНИЕ И ОСОБЕННОСТИ КАТАЛИЗА 9
1.1. Общая характеристика липаз из разных источников 9
1.2. Аминокислотный и углеводный состав И
1.3. Структура активного центра и поверхностная активация липазы 13
1.4. Механизм катализа и кинетические модели действия липаз 18
1.5. Факторы, влияющие на липолиз 21
1.6. Субстратная специфичность липаз 31
1.7. Методы определения активности липаз 34
1.8. Применение липаз 40
II СИСТЕМЫ ОБРАЩЕННЫХ МИЦЕЛЛ, ИХ ДОСТОИНСТВА 47
2.1 Системы обращенных мицелл, общие характеристики 47
2.2. Ферменты в системах обращенных мицелл: регуляция их активности и
олигомерного состава 49
2.3. Катализ липазой в системах обращенных мицелл 56
III. ЛИПОКСИГЕНАЗА: СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА 61
3.1. Нахождение в природе, катализируемые реакции и биолопіческая важность липоксигеназ 61
3.2. Структура активного центра и механизм катализа липоксигеназ 65
IV. КИНЕТИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ ПОЛИФЕРМЕНТНЫХ РЕАКЦИЙ 69
ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ 73
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 74
I. МАТЕРИАЛЫ 74
II. МЕТОДЫ 76
2.1. Характеристика препаратов ферментов 76
2.2. Определение каталитической активности ферментов 77
2.3. Химическая модификация ферментов 79
2.4. Седиментационный анализ 80
2.5. Изучение собственной флуоресценции липаз 81
2.6. Изучение стабильности липаз 81
2.7. Синтез ацилированного ацикловира, катализируемый липазой в системе обращенных мицелл 82
2.8. Изучение биферментной системы «липаза / липоксигеназа» 84
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 87
I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТОВ ЛИПАЗ 87
1.1. Панкреатическая липаза свиньи 87
1.2. Липаза из Mucor miehei. 87
1.3. Липаза из Chromobacterium viscosum 87
II. РЕГУЛЯЦИЯ ЛИПОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ 89
2.1. Оптимизация условий катализа 89
2.1.1. Зависимость каталитической активности липаз от рН среды, температуры реакции и концентрации фермента 89
2.1.2. Кинетические характеристики реакций, катализируемых липазами в водной среде и в системе обращенных мицелл 93
2.1.3. Влияние ионов кальция и желчных солей на липолиз в водном растворе и в системе обращенных мицелл 98
2.2. Регуляция олигомерного состава липаз в системе обращенных мицелл 105
2.3. Регуляция активности липаз изменением концентрации ПАВ в системе обращенных мицелл 109
2.4. Химическая модификация липазы 116
2.5. Собственная флуоресценция липаз 121
2.6. Предполагаемая локализация липаз в системе обращенных мицелл 125
III. СТАБИЛЬНОСТЬ ЛИПАЗ 128
IV. РЕГУЛЯЦИЯ СИНТЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛИПАЗ 135
V. БИФЕРМЕНТНАЯ СИСТЕМА «ЛИПАЗА /ЛИПОКСИГЕНАЗА» 137
5.1. Катализ соевой липоксигеназой-1 в системе обращенных мицелл 138
5.2. Кинетические характеристики биферментной реакции: определение скорость лимитирующей стадии 140
5.3. Зависимости кинетических констант биферментного процесса от степени гидратации и концентрации АОТ в системе обращенных мицелл 142
5.4. Тестирование масел с помощью биферментной системы «липаза/ липоксигеназа» 144
ВЫВОДЫ 148
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 150
БЛАГОДАРНОСТИ 184
