Введение
Глава 1. Организация хроматина и регуляция транскрипции у дрозофилы (обзор литературы) .9
1.1 Структура интерфазного хроматина, ремоделинг и транскрипция 9
1.1.1 АТФ-зависимая мобилизация нуклеосом 9
1.1.2 "Язык" ковалентних гистоновых модификаций 12
1.1.3 ДНК-связывающие транскрипционные факторы и коактиваторы транскрипции 14
1.1.4 Политенная хромосома как модель интерфазной 16
1.2 Дозовая компенсация - уникальный пример хромосомоспецифичной регуляции транскрипции... 18
1.2.1 Феномен дозовой компенсации 18
1.2.2 Гены дозовой компенсации у дрозофилы 19
1.2.3 Комплекс дозовой компенсации 20
1.2.4 Предполагаемые механизмы действия комплекса дозовой компенсации 24
1.2.5 Почему X? -. 26
1.2.6 Сборка и распространение комплекса дозовой компенсации по Х-хромосоме 29
1.2.7 Эволюция MSL - комплекса 32
1.3 Broad Complex - ключевой транскрипционный фактор метаморфоза дрозофилы 34
1.3.1 Вг-С - ключевой ген метаморфоза дрозофилы 34
1.3.2 Молекулярная организация локуса. Белки BR-C 35
1.3.3 Вг-С и регуляция метаморфоза. Предполагаемые механизмы 37
1.3.3.1 Экспрессия гена 37
1.3.3.2 Корреляция между генетическими функциями гена и белковыми изоформами BR-C 38
1.3.3.3 Вг-С и транскрипция регулируемых генов 39
1.3.3.4 Роль продуктов гена. Вг-С в некоторых процессах метаморфоза 42
Заключение и задачи исследования .-44
Глава 2. Материалы и методы 46
2.1 Линии Drosophila melcmogaster и их ведение 46
2.2 In situ гибридизация 48
2.2.1 Приготовление ДНК зондов 48
2.2.2 Приготовление препаратов для гибридизации in situ 48
2.2.3 Гибридизация in situ в политенных хромосомах 48
2.3 Иммуноокрашивание политенных хромосом 48
2.3.1 Приготовление препаратов 48
2.3.2 Иммуноокрашивание политенных хромосом 49
2.3.3 Анализ препаратов 50
3.2.1 Антитела, использованные в работе 50
Глава 3. Особенности локализации комплекса белков MSL в политенных хромосомах Drosophila melanogaster ..51
3.1 Особенности локализации комплекса на Х-хромосоме 51
3.1.1 Локализация комплекса дозовой компенсации на Х-хромосоме самцов 51
3.1.2 Локализация MSL1 и MSL2 белков в линиях, мутантных по некоторым msl-генам 54
3.1.3 Связывание белков дозовой компенсации с Х-хромосомой в условиях дефицита в ядре полного функционального комплекса 58
3.2 Особенности локализации комплекса на аутосомах 66
3.2.1 Аутосомные сайты у самцов линии Oregon-R 66
3.2.2 Аутосомные сайты в линиях с нехваткой/избытком комплекса в ядре 68
3.2.3 Распространение комплекса по аутосомам от места встройки трансгена roXl в условиях избытка в ядре коровых белков дозовой компенсации 70
3.2.4 Аутосомные сайты повышенной аффинности к комплексу 73
3.2.5 Локализация MSL1 и MSL2 белков в районе аутосомных трансгенов msl2 73
3.3 Влияние теплового шока на локализацию комплекса на хромосомах 74
3.3.1 Локализация комплекса на Х-хромосоме под воздействием теплового шока 74
3.3.2 Множественное аутосомное связывание комплекса в условиях теплового шока 76
3.4 Комплекс дозовой компенсации и его роль в процессе транскрипции 79
3.4.1 Локализация на хромосомах антител, специфически выявляющих форму гистона H4AcLysl6..80
3.4.2 Локализация JIL1 на политенной Х-хромосоме самок и самцов дрозофилы 83
3.4.3 Локализация ISWI на Х-хромосоме самцов и самок дрозофилы 83
3.5 Локализация в политенных хромосомах белка MLE 85
3.5.1 Распределение MLE в политенных хромосомах самцов и самок дрозофилы в лабораторной линии дикого типа Oregon-R 86
3.5.2 . Зависимость аутосомной локализации MLE от других белков комплекса 86
3.5.3 Локализация белка MLE в условиях теплового шока 90
3.6 Обсуждение 92
3.6.1 Связывание и распространение комплекса по Х-хромосоме: иерархия сайтов по их специфичности к комплексу. Верификация существующей модели сборки и распространения комплекса по хромосоме 92
3.6.2 Анализ случаев взаимодействия комплекса с аутосомами как один из подходов к пониманию механизмов его взаимодействия с хроматином. Факторы, нарушающие Х-специфичную локализацию комплекса 95
3.6.3 Локализация комплекса ДК в политенной хромосоме и его роль в процессах транскрипции 99
3.6.4 Функции геликазы MLE 104
Глава 4 . Особенности локализации на хромосомах белков Broad-Complex 107
4.1 Локализация белков BR-C в политенных хромосомах слюнных желёз личинок в лабораторной линии дикого типа Oregon-R 108
4.2 Локализация в политенных хромосомах слюнных желез личинок 3-го возраста антител, специфично узнающих изоформы Zl, Z2, Z3 HZ4 115
4.3 Локализация белков BR-C в политенных хромосомах предкуколки 125
4.4 Роль белков Broad-Complex в регуляции экдизонового каскада генов в слюнной железе дрозофилы (обсуждение) 127
Выводы 130
Список цитированной литературы 132
