Введение
2. Литературный обзор 8
2.1. Введение 8
2.2. Истины морских беспозвоночных 11
2.2.1. Происхождение, локализация и биосинтез лектинов 12
2.2.2. Функции лектинов в организме 14
2.3. Углеводная специфичность лектинов 15
2.3.1. Моносахариды 15
2.3.1.1. GalNAc/GlcNAc специфичные лектины 18
2.3.2. Олигосахариды и полисахариды 19
2.3.2.1. Маннан-связывагощие белки 20
2.3.3. Углевод-содержащие гетерополимеры 22
2.3.3.1. Гепарин-связывающие лектины 24
2.4. Строение углевод-связывающих сайтов лектинов 32
2.5. Биологическая активность лектинов 38
2.6. Заключение 41
3. Материалы и методы 43
3.1. Материалы 43
3.2. Выделение лектинов 46
3.2.1. Выделение DTL-А 46
3.2.1.1. Получение аффинного сорбента 46
3.2.1.2. Приготовление экстракта асцидии Didemnum ternatanum 46
3.2.1.3. Гель-фильтрация DTL-A на Sephadex G-150 46
3.2.1.4. Аффинная хроматография 47
3.2.2. Выделение и очистка лектинов из Serpula vermicularis 47
3.2.2.1. Получение перекрестно-сшитого сорбента Ova-BSM 47
3.2.2.2. Приготовление экстракта Serpula vermicularis 47
3.2.2.3. Аффинная хроматография 48
3.2.2.4. Хроматография на DEAE-Toyopearl 48
3.2.2.5. Гель-фильтрация на Sephadex G-150 48
3.3. Определение молекулярной массы и гомогенности лектинов. 49
3.3.1. SDS-электрофорез 49
3.3.2. Гель-проникающая хроматография . 49
3.3.3. Вестерн-блоттинг. 50
3.4. Твердофазный анализ взаимодействия лектинов с гликоконъюгатами и сахарами. 50
3.4.1. Конъгогаты лектинов с пероксидазой из хрена (ПХ) 50
3.4.2. Взаимодействие лектинов с гликопротеинами 51
3.4.3. Ингибирование связывания лектинов со специфическими гликопротеинами 51
3.5. Исследование физико-химических свойств лектинов 52
3.5.1. Эффект рН на взаимодействие лектинов со специфическими лигандами 52
3.5.2. Температурная зависимость взаимодействия лектинов с их лигандами 52
3.5.3. Эффект дивалентных катионов на активность лектинов. 53
3.6. Определение биологической активности лектинов 53
3.6.1. Определение цитотоксичности 53
3.6.2. Ингибирование репликации ВИЧ-1 Шп 53
3.6.3. Ингибирование лектинами межклеточного слияния (ингибирование синцитиеобразования) 55
4. Результаты и обсуждение 57
4.1. Выделение DTL-A 57
4.2. Свойства DTL-A 62
4.3. Выделение и очистка лектинов из Serpula vermicularis 70
4.4. Свойства лектинов из Serpula vermicularis 78
4.5. Биологическая активность лектинов 84
4.5.1. Цитотоксическая активность 84
4.5.2. Анти-ВИЧ активность лектинов 87
4.6. Заключение 92
5. Выводы 95
Благодарности 96
Литература 97
