Введение
II. Литературный обзор 9
1. Введение .9
2. Сахарный диабет 1-го типа: причины возникновения и иммунологические аспекты развития 10
2.1. Экспериментальные модели для исследования СД1 11
2.1.1. Токсический диабет 11
2.1.2. Спонтанный диабет 12
2.2. Стадии развития диабета 1-го типа 12
2.2.1. Инсулиты 14
2.2.2. Медиаторы воспаления 15
2.2.3. Аутоантитела при диабете 1-го типа
2.3. Диагностика сахарного диабета 1-го типа 18
2.4. Дистальная полинейропатия 19
2.5. Нейрональные антитела при СД1 21
3. Структура и функции человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) 22
3.1. Окислительно-восстановительное состояние альбумина 23
3.2. Гликирование альбумина
3.2.1. Ранние продукты гликирования 26
3.2.2. Конечные продукты гликирования 27
3.3. Гликирование белков плазмы крови 29
3.3.1. Фибриноген 29
3.3.2. Коллаген 30
3.3.3. Ig G
3.4. Методы определения гликированного альбумина 31
3.5. Исследование гликированного альбумина
3.5.1. Влияние гликирования и окисления на структуру и свойства альбумина .34
3.5.2. Исследование сайтов связывания с глюкозой 37
III. Экспериментальная часть .39
1. Исследование альбумина in vitro и в сыворотке крови 39
2. Формирование групп пациентов с диагнозом СД1 43
3. Определение проинсулина в сыворотке крови детей с СД1 .45
4. Электромиографическое исследование (ЭМГ) 45
5. Определение аутоантител к нейрональным белкам в сыворотке детей с СД1 46
6. Экспериментальная модель диабета (СТЗ-крысы) .46
7. Статистическая обработка данных 47
IV. Результаты и обсуждение .47
1. Содержание проинсулина у детей с диабетом 1- го типа 47
2. Исследование гликированного альбумина in vitro 51
2.1. Окислительное гликирование альбумина in vitro 52
2.1.1. Определение содержания кетоамина, SH-групп и карбонильных групп в молекуле альбумина, инкубированного в присутствии физиологических концентраций глюкозы 52
2.1.2. Определение сайтов гликирования в альбумине, предварительно гидролизированном трипсином, методами MALDI –TOF и HPLC/MS/MS 54
2.1.3. Флуоресценция ЧСА и содержащегося в нём пентозидина 58
2.1.4. Анионообменная ВЭЖХ различных препаратов альбумина 61
2.2. Гликирование ЧСА в нефизиологических условиях 64
3. Определение гликированного альбумина в сыворотке крови .68
3.1. Подбор методик для выделения альбумина из сыворотки 68
3.2 Определение гликированного альбумина у детей с диабетом 1-го типа 74
4. Выявление дистальной полинейропатии у детей с диабетом 1-го типа
5. Определение аутоантител к нейрональным белкам у детей с диабетом 1-го типа .87
6. Определение нейрональных аутоантител у крыс с диабетом, вызванным стрептозотоцином .90
V. Заключение 94
VI. Выводы .96
Список опубликованных научных работ по теме диссертации 97
Благодарности 98
Литература
