Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Свойства -амилоида 11
1.1.1. Болезнь Альцгеймера. 11
1.1.2. Бета-амилоидный пептид 19
1.1.3. А и кальциевый гомеостаз 24
1.1.4. Формирование ионных каналов амилоидом 26
1.1.5. Митохондрии в А патологии 28
1.1.6. -Амилоид и окислительный стресс 31
1.2. Свободные радикалы в клетке. 36
1.2.1. Общие свойства свободных радикалов 36
1.2.3. Митохондрии и продукция АФК 41
1.2.4. Ксантин оксидаза 46
1.2.5. НАДФН оксидаза 48
1.2.5.а. Цитозольные регуляторные субъединицы НАДФН оксидазы 51
1.2.5.б. Активация НАДФН оксидазы 52
1.2.5.в. НАДФН оксидаза в клетках центральной нервной системы 53
1.2.6. Цитохром P-450 54
1.2.7. Антиоксидантная система клетки 56
1.2.7.1. Ферментативные антиоксиданты 56
1.2.7.1.а. Супероксид дисмутаза 56
1.2.7.1.б. Глутатион пероксидаза 58
1.2.7.1.в. Каталаза 1.2.7.2. Неферментативные антиоксиданты 59
1.2.7.2.а. Витамины 59
1.2.7.2.б. Глутатион, основные функции. 60
1.2.7.2.6.1. Синтез глутатиона 60
1.2.7.2.6.2. Метаболизм глутатиона 61
1.3 Мембранный холестерин 62
1. 4. Кальциевая сигнализация. 64
1.4.1. Кальциевые насосы и обменники плазмалеммы и внутриклеточных органелл 66
1.4.1.а. Са2+-ATPазы 66
1.4.1.б. Ca2+ -обменники 68
1.4.2.Кальциевые каналы 69
1.4.2.1. Кальциевые каналы плазмалеммы 69
1.4.2.2. Внутриклеточные Са2+-каналы 76
1.2.5. Митохондрии 79
1.2.5.1. Роль митохондрий в кальциевой сигнализации 82
1.2.5.2. Аккумуляция Са2+ митохондриями 83
1.2.5.3. Система вывода Са2+ из митохондрий 86
1.2.5.4. Митохондриальная пора 87
ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1 Культуры клеток 90
2.2 Определение содержания цитозольного кальция и митохондриального потенциала 2.3. Метод определения содержания глутатиона 94
2.4. Дифференциальный подсчет количества мертвых и живых клеток 94
2.5. Измерение скорости производства активных форм кислорода 95
2.6. Измерение транспорта флуоресцентного А в гипокампальные астроциты и нейроны 96
2.7 Метод регистрации НАДН 96
2.8 Измерение уровня холестерина в мембранах клеток 97
2.9. Измерение NO 97
2.10. Вестерн блот анализ 98
2.11. Иммунофлуоресценция 99
ГЛАВА 3. Результаты и их обсуждение 101
3.1.Влияние РА 25-35 и 1-42 на [Ca2+]c гиппокампальных и кортикальных нейронов и астроцитов. 102
3.2.рА-индуцированный сигнал в астроцитах и его зависимость от внутри- и внеклеточных Са2+-депо 106
3.3. рА-индуцированный вход ионов Са2+ в астроциты 113
3.4. Пути рА-индуцированного входа внешнего Са2+ 117
3.5. Ионная селективность каналов на плазмаллемме астроцитов сформированных из А 122
3.6. Зависимость А-индуцированного кальциевого сигнала в астроцитах от агрегации и длины пептидной цепочки 127
3.7. Измерение проникновения флуоресцентного А 1-42 в нейроны и астроциты 131
3.8. Зависимость А-индуцированного Са2+-сигнала от концентрации холестерина в плазмаллемме нейронов и астроцитов 133
3.9. Влияние Р-амилоида на Ауm 1 3.10. Роль [Ca2+]с в Р-амилоид стимулированных изменениях Дут 143
3.11. Способность дыхательных субстратов предотвращать действие РА на митохондрии 145
3.12. Роль свободных радикалов в митохондриальной деполяризации индуцированной рА 149
3.13. Роль циклоспорин-чувствительной поры в действии рА на митохондрии 152
3.14. Источники рА-индуцированной гиперпродукции свободных радикалов - роль НАДФН оксидазы 157
3.15. Эффект РА на продукцию АКФ 161
3.16. Активация ПАРП при действии А 166
3.17. Действие А на [GSH] в астроцитах и нейронах 172
3.18. Влияние А на перекисное окисление липидов 176
3.19. Влияние А на продукцию NO в нейронах и астроцитах 178
3.20. Токсичность рА в свете его действия на кальциевый сигнал, митохондриальный потенциал и НАДФН оксидазу 181
3.21. Экспрессия субъединиц НАДФН оксидазы в астроцитах 189
3.22. Функциональный анализ НАДФН оксидазы в астроцитах 192
3.23. Активация НАДФН оксидазы ионами кальция 196
3.24. Активация астроцитов стимулирует НАДФН оксидазу 204
3.25. Активность НАДФН оксидазы астроцитов регулируется мембранной протонной проводимостью и градиентом рН 206
3.26. Роль клеток микроглии в механизме нейротоксичности -амилоида. А-индуцированные изменения [Са2+]с микроглии 210
3.27. Механизм активации НАДФН оксидазы в клетках микроглии при действии А 2 3.28. Роль CLIC 1 в А стимуляции НАДФН оксидазы 219
Заключение 223
Выводы 230
Список используемой литратуры
