Введение
1 Обзор литературы 8
1.1 Свойства оксида азота и его источники в организме 8
1.1.1 Синтез N0 в организме 8
1.1.2 Физико-химические свойства оксида азота 12
1.2 Функции оксида азота в нервной системе 20
1.2.1 Роль N0 в регуляции электрофизиологической активности нейронов и синаптической передаче 21
1.2.2 Роль N0 в регуляции внутриклеточных процессов 22
1.2.3 Роль N0 в регуляции межклеточных взаимодействий 25
1.2.4 Нейрозащитные и нейродеструктивные свойства N0 27
1.2.5 Роль N0 в нервной системе беспозвоночных животных 27
1.3 Роль N0 в регуляции переноса кислорода эритроцитами 28
1.3.1 Действие N0 на сосуды 29
1.3.2 Взаимодействие N0 с гемоглобином эритроцитов 30
2 Цели и задачи исследования 35
3 Материалы и методы 36
3.1 Приготовление препаратов. Растворы и реактивы 36
3.1.1 Приготовление препаратов нервной системы пиявки 36
3.1.2 Приготовление препаратов нервной системы прудовика 38
3.1.3 Приготовление препаратов миелиновых нервных волокон 38
3.1.4 Доноры оксида азота 39
3.1.5 Создание церебральной ишемии и постишемической реперфузии у крыс 41
3.2 Регистрация активности одиночных ионных каналов 41
3.3 Регистрация электрофизиологических характеристик нервных волокон . 43
3.4 Микрофлуориметрические исследования свойств нейронов 43
3.4.1 Регистрация изменений количества Са2+, связанного на плазматической мембране и во внутриклеточных компартментах 44
3.4.2 Регистрация изменений потенциала внутренней мембраны митохондрий нейронов 45
3.4.3 Регистрация изменений содержания окисленных флавопротеинов в нейронах 45
3.4.4 Математическая обработка результатов флуоресцентных исследований 46
3.5 Метод конфокальной лазерной сканирующей микроскопии 47
3.6 Регистрация спектров поглощения нейронов 48
3.7 Метод спектроскопии комбинационного рассеяния 48
3.7.1 Применение спектроскопии РКР для исследования микровязкости клеточных мембран 49
3.7.2 Применение спектроскопии КР для исследования конформации гемо-порфирина гемоглобина и 02-связывающих свойств гемоглобина 51
3.8 Метод лазерной интерференционной микроскопии и вейвлет-анализ 57
3.8.1 Применение лазерной интерференционной микроскопии для исследования интегральных свойств плазматической мембраны и цитоплазмы нейронов 57
3.8.2 Анализ динамики локальных значений показателя
преломления нейронов 60
3.9 Метод электронного парамагнитного резонанса 63
4 Результаты исследования и обсуждение 65
4.1 Влияние оксида азота на свойства плазматической мембраны нейронов и нерв
ных волокон 65
4.1.1 Действие N0 на активность потенциалзависимых К+-каналов нейронов 65
4.1.2 Действие N0 на электрофизиологические характеристики нервных волокон 67
4.1.3 Перераспределение Са2+, связанного на плазматической мембране нейронов и нервных волокон при действии N0 70
4.1.4 Действие N0 на микровязкость плазматической мембраны нервных волокон 73
4.2 Действие оксида азота на функциональное состояние внутриклеточных органоидов нейронов 75
4.2.1 Влияние N0 на потенциал внутренней мембраны митохондрий нейронов и содержание окисленных/восстановленных флавопротеинов 75
4.2.2 Локальные изменения потенциала внутренней мембраны митохондрий нейронов при действии N0 80
4.2.3 Изменение содержания Са2+, связанного во внутриклеточных компарт- ментах, и вязкости мембраны цитосом нейронов при действии N0 83
4.3 Действие оксида азота на оптические свойства нейронов 88
4.3.1 Влияние N0 на изменения показателя преломления нейронов в примем-бранной области 88
4.3.2 Влияние N0 на локальные изменения показателя преломления нейронов в области цитоплазмы 90
4.3 3 Анализ характерных частот динамики показателя преломления нейронов 96
4.4 Действие оксида азота на свойства эритроцитов 101
4.4.1 Влияние доноров N0 на кислород-связывающие свойства гемоглобина и микровязкость плазматической мембраны эритроцитов 103
4.4.2 Изменение кислород-связывающих свойств гемоглобина и вязкости плазматической мембраны эритроцитов при церебральной ишемии и по-стишемической реперфузии у крыс 106
5 Заключение 113
6 Выводы 117
Литература
