Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Современное состояние проблемы воспалительных заболеваний кишечника 10
1.2. Роль различных типов клеток иммунной системы в развитии иммунопатологических процессов при воспалительных заболеваниях кишечника 14
1.3. Стромальные клетки кишечника и взаимодействие с клетками иммунной системы в ткани кишки 21
1.4. Регенерация как заключительная фаза иммунного воспаления. Роль фибробластов в регенерации повреждений и регуляции воспаления в кишке 27
1.5. Разработка препаратов на основе лекарственных пептидов для лечения иммунологически активных воспалительных заболеваний кишечника 40
Глава 2. Материалы и методы исследований 42
2.1 Препарат иммуномодулирующего тетрадекапептида 42
2.2. Модель экспериментального колита у мышей 42
2.3. Методы исследования экспериментального колита 43
2.3.1. Количественное определение клинических и патоморфологических проявлений экспериментального колита у мышей 43
2.3.2. Исследование интенсивности и качественных характеристик иммунных процессов в ткани кишки при экспериментальном колите у мышей 45
2.3.2.1. Выделение мононуклеарных клеток из ткани толстой кишки мыши 45
2.3.2.2. Проточная цитофлюориметрия, подсчет и сортировка клеток 46
2.3.2.3. Фиксация и окрашивание сортированных клеток на стекле 49
2.3.2.4. Полимеразная цепная реакция «в режиме реального времени» 50
2.4. Клеточные культуры 54
2.4.1. Активация фибробластов 55
2.4.2. Тест заживления повреждения монослоя (scratch-тест) 55
2.4.3. Микроскопия 56
2.4.3.1. Микроскопическое исследование структур цитоскелета (-SMA и F-актина) 56
2.4.3.2. Микроскопическое исследование фосфорилирования и перераспределения общей формы киназ ERK1/2 57
2.4.3.3. Количественный анализ изображений 58
2.4.4. Вестерн-блоттинг 59
2.4.5. Получение линии NIH/3T3 CD44KO 60
2.5. Статистическая обработка данных 62
Глава 3. Результаты 64
3.1. Исследование действия иммуномодулирующего тетрадекапептида TEKKRRETVEREKE с помощью модели деструктивного воспаления толстого кишечника 64
3.1.1. Изучение влияния экспериментальной терапии ТДП на клинические характеристики воспаления толстого кишечника у лабораторных мышей 64
3.1.2. Изучение влияния экспериментальной терапии ТДП на морфологические проявления патологии толстого кишечника в модели язвенного колита 67
3.1.3. Изучение влияние ТДП на клеточный состав иммунного инфильтрата в стенке воспаленной толстой кишки в модели DSS-колита у мышей 69
3.1.4. Изучение влияние ТДП на функциональную активность клеток воспалительного инфильтрата в ткани толстой кишки, пораженной DSS-индуцированным колитом 75
3.1.4.1. Исследование продукции мРНК воспалительных и противоспалительных факторов в ткани толстой кишки 75
3.1.4.2. Исследование продукции мРНК воспалительных и противоспалительных факторов в сортированных популяциях Ly6G+-гранулоцитов и Ly6C+-моноцитов/макрофагов из ткани толстой кишки мышей с экспериментальным колитом 79
3.2. Исследование влияния иммуномодулирующего тетрадекапептида TEKKRRETVEREKE на клеточные процессы, определяющие регенерацию повреждений после деструктивного воспаления 83
3.2.1. Изучения влияния ТДП на активацию SMAD- и MAPK-сигнальных путей в фибробластах NIH/3T3 84
3.2.2. Изучение влияния ТДП на дифференцировку фибробластов в миофибробласты 89
3.2.3. Исследование влияния ТДП на подвижность фибробластов NIH/3T3 в тесте заживления повреждения в монослое клеток in vitro 94
3.2.4. Исследование значения CD44 для активирующего действия ТДП на фибробласты 97
Глава 4. Обсуждение 104
4.1. Обсуждение механизмов иммуномодулирующего действия ТДП в модели экспериментального язвенного колита 104
4.2. Обсуждение действия иммуномодулирующего тетрадекапептида на фибробласты in vitro . 112
Заключение 120
Выводы 123
Список сокращений 125
Список литературы 127
