Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1 Фотодинамическая терапия 12
1.1.1 Фотофизические и фотохимические механизмы при ФДТ 12
1.1.2 Фотосенсибилизаторы, используемые для ФДТ 14
1.1.3 Внутриклеточная локализация фотосенсибилизатора при ФДТ 15
1.1.4 Активные формы кислорода и окислительный стресс 17
1.1.5 Окислительный стресс клеток при ФДТ 20
1.1.6 Перекисное окисление липидов 21
1.1.7 Радахлорин как фотосенсибилизатор 22
1.1.8 Механизмы ФД-индуцированной клеточной гибели 23
1.2 Кальциевая сигнализация в клетках 28
1.2.1 Кальциевые насосы и обменники 30
1.2.2 Кальциевые каналы
1.2.2.1 Кальциевые каналы плазматической мембраны 31
1.2.2.2 Внутриклеточные кальциевые каналы
1.2.3 Митохондрии и кальциевая сигнализация 34
1.2.4 Роль Са2+ при ФДТ 35
1.3 ФДТ опухолей мозга 37
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 41
2.1 Используемые реактивы 41
2.2 Объекты исследования 41
2.3 Фотодинамическое воздействие 44
2.3.1 Исследование динамики накопления и выведения радахлорина 45
2.3.2 Исследование импульсной активности нейронов при фотодинамическом воздействии 46 2.3.3 Определение типа клеточной гибели нейронов и глиальных клеток 47
2.3.4 Фотодинамическое воздействие на культуры нейронов и астроцитов 47
2.4 Исследование динамики параметров клеток флуоресцентными зондами 49
2.4.1 Общая схема эксперимента 49
2.4.2 Флуоресцентные кальциевые зонды
2.4.2.1 Определение содержания Са2+ в цитозоле 51
2.4.2.2 Определение содержания Са2+ в митохондриях
2.4.3 Регистрация изменения скорости перекисного окисления липидов 53
2.4.4 Определение митохондриального потенциала
2.5 Ингибиторный анализ 56
2.6 Статистический анализ 57
ГЛАВА 3. Результаты исследований 58
3.1 Исследование фотодинамического воздействия радахлорина на нейроны и глиальные клетки 58
3.1.1 Спектральные характеристики радахлорина 58
3.1.2 Внутриклеточное распределение радахлорина в нейронах и глиальных клетках
3.1.3 Динамика накопления и выведения радахлорина в нервной ткани 60
3.1.4 Биоэлектрические реакции нейронов на ФД воздействие радахлорина 63
3.1.5 Фотоиндуцируемая гибель нейронов и глиальных клеток 64
3.2 Изменение уровня ионов кальция в нейронах и астроцитах при ФД воздействии 68
3.2.1 Изменение уровня цитозольного кальция в нейронах и астроцитах при ФД воздействии радахлорина 68
3.2.2 Вклад внеклеточных ионов кальция в ответ нейронов и астроцитов на ФД воздействие 75
3.2.2.1 Роль NMDA рецепторов в фотоиндуцируемом повышении [Ca2+]c нейронов и астроцитов 75
3.2.2.2 Фотоиндуцируемый вход ионов кальция в нейроны и астроциты из внеклеточного пространства 77
3.2.3 Вклад кальциевого депо ЭР в фотоиндуцируемый кальциевый ответ нейронов и астроцитов 84
3.2.4 Участие фосфолипазы С в кальциевом ответе на фотодинамическое воздействие 87
3.2.5 Роль АФК в ответе нейронов и астроцитов на ФД воздействие радахлорина 90
3.2.6 Изменение скорости перекисного окисления липидов при ФД воздействии радахлорина 93
3.2.7 Исследование участия митохондрий в ответе нейронов и астроцитов на ФД воздействие 95
3.2.7.1 Изменения [Ca2+]m в ответ на ФД воздействие радахлорина 95
3.2.7.2 Изменения трансмембранного митохондриального потенциала при ФД
воздействии 99
ГЛАВА 4. Обсуждение полученных результатов 104
4.1 Эффективность ФД воздействия радахлорина на нервные клетки 104
4.2 Роль Са2+ в ответе нейронов и астроцитов на ФД воздействие радахлорина 106
4.3 Роль митохондрий в ответе нейронов и астроцитов на ФД воздействие радахлорина 110
Заключение 112
Выводы 115
Список литературы
