Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Морфология и функции миелинового нервного волокна 10
1.2. Роль липидного состава и упорядоченности жирнокислотных «хвостов» липидов мембран миелинового нервного волокна в функциональных процессах 13
1.2.1. Роль липидного состава миелинового нервного волокна 13
1.2.2. Упорядоченность жирнокислотных «хвостов» липидов мембраны и поверхностный заряд 14
1.2.3. Изменения фосфолипидного и жирнокислотного состава липидов миелинового нервного волокна при изменениях структуры белков аксо-глиального комплекса .15
1.3. Проведение серии потенциалов действия миелиновым нервным волокном 16
1.4. Роль холестерина в функционировании клеток 17
1.5. Механизм действия метил--циклодекстрина 21
1.6. Действие метил--циклодекстрина на клетки 28
1.7. Перераспределение и транспорт Са2+ в нервном волокне 29
1.7.1. Гомеостаз Са2+ в нервном волокне 29
1.7.2. Роль Са2+ в формировании поверхностного заряда нервной клетки 30
1.7.3. Роль Са2+ в регуляции упорядоченности жирнокислотных «хвостов» мембран .31
1.7.4. Роль Са2+ в процессах проведения возбуждения миелиновым нервным волокном 31
1.8. Демиелинизация миелинового нервного волокна. Действие лизолецитина на клетки 34
Глава 2. Цели и задачи исследования 35
Глава 3. Материалы и методы 36
3.1. Приготовление препаратов. Растворы и реактивы 36
3.1.1. Приготовление препаратов миелиновых нервных волокон 36
3.1.2. Культура гиппокампальных нейронов 37
3.2. Методы исследования 37
3.2.1. Метод экстраклеточной регистрации амплитуды потенциалов действия нервного волокна 37
3.2.2 Флуоресцентная микроскопия 38
3.2.3.1. Принцип метода и зонды 38
3.2.3.2. Протокол экспериментов 40
3.2.3.3. Обработка полученных данных 42
3.2.3 Лазерная интерференционная микроскопия 43
3.2.3.1. Принцип метода и зонды 43
3.2.3.2. Протокол экспериментов 54
3.2.3.3. Обработка полученных данных 57
3.2.3.4. Анализ динамики оптической разности хода 57
3.2.3.5. Протокол экспериментов 58
3.2.4 Спектроскопия комбинационного рассеяния нервного волокна 61
3.2.4.1. Принцип метода 61
3.2.4.2. КР-спектроскопия молекул каротиноидов 63
3.2.4.3. Протокол экспериментов 66
3.2.4.4. КР-спектроскопия молекул фосфолипидов 71
3.2.4.5. Протокол экспериментов 73
3.2.4.3. Обработка полученных данных 76
3.2.5 Метод электронного парамагнитного резонанса 77
3.2.5.1. Принцип метода и зонды 77
3.2.5.2. Протокол экспериментов 77
3.2.5.3. Обработка полученных данных 78
Глава 4. Результаты исследования и их обсуждение .81
4.1. Исследование состояния липидного бислоя мембран, цитоплазмы и
морфологии миелинового нервного волокна при выполнении функций 81
4.1.1. Исследование изменения упорядоченности жирнокислотных «хвостов» липидов мембран миелина и перехвата Ранвье при проведении серии потенциалов действия миелиновым нервным волокном 81
4.1.2. Перераспределение Са2+ при проведении серии потенциалов действия миелиновым нервным волокном 91
4.1.3. Исследование роли структуры миелина в функционировании нервного волокна 98
4.2. Исследование состояния липидных бислоев мембраны, цитоплазмы и
морфологии миелинового нервного волокна при инкубации с холестерин экстрагирующим агентом метил--циклодекстрином 101
4.2.1. Исследование изменений упорядоченности жирнокислотных «хвостов» липидного бислоя мембран перехвата Ранвье и миелина нервных волокон при действии метил--циклодекстрина 101
4.2.2. Исследование перераспределения ионов Са2+ в нервном волокне при действии метил--циклодекстрина 112
4.2.3. Исследование структуры миелина, цитоплазмы и морфологии миелинового нервного волокна при инкубации с холестерин-экстрагирующим агентом метил--циклодекстрином 117
4.2.4. Исследование динамики оптической разности хода лучей в различных участках миелинового нервного волокна при экстракции холестерина с помощью метил--циклодекстрина 120
4.2.5. Исследование морфологии и структуры цитоплазмы нейрона при инкубации с холестерин-экстрагирующим агентом метил--циклодекстрином 121
4.2.6. Исследование динамики оптической разности хода лучей в различных участках нейрона при инкубации с холестерин-экстрагирующим агентом метил--циклодекстрином 123
4.3. Изучение электрофизиологических свойств миелиновых нервных волокон при экстракции холестерина 124
4.3.1. Потенциал действия миелиновых нервных волокон при инкубации с метил--циклодекстрином 124
4.3.2. Упорядоченность жирнокислотных «хвостов» липидных бислоев мембран миелиновых нервных волокон при электрической стимуляции на фоне инкубации с метил--циклодекстрином 125
4.3.3. Изучение перераспределения ионов Са2+ в нервном волокне при проведении возбуждения на фоне инкубации с метил--циклодекстрина 128
4.4. Изменение свойств мембраны миелинового нервного волокна при демиелинизации с помощью лизоформ. 137
4.4.1. Исследование упорядоченности жирнокислотных «хвостов» липидных бислоев мембран перехвата Ранвье и миелина нервных волокон при действии лизолецитина. 137
4.4.2. Исследование распределения ионов Са2+ в нервном волокне при инкубации с лизолецитином 139
4.4.3. Изучение морфологии и структуры цитоплазмы миелинового нервного волокна при инкубации с лизолецитином 143
4.4.4. Исследование потенциала действия миелиновых нервных волокон при инкубации с лизолецитином 143
Заключение .147
Выводы 154
Список литературы .156
