Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1 Актин: структура и функции 13
1.1.1 Историческая справка по изучению актина 13
1.1.2 Структурно-функциональные характеристики актина
1.2 Миозин: структура и функции 23
1.3 Тропомиозин: структура, функции, патология .
1.3.1 Изоформы тропомиозина 31
1.3.2 Структура тропомиозина 34
1.3.3 Модель стерического блокирования 43
1.3.4 Патологии, ассоциированные с мутациями в генах, кодирующих изоформы тропомиозина 1.3.4.1 Немалиновая миопатия 46
1.3.4.2 Кэп-миопатия 49
1.3.4.3 Врождённая диспропорция типов волокон 52
1.3.4.4 Дистальный артрогрипоз 54
1.3.4.5 Мутации в тропомиозине, вызывающие разные патологии и их перекрывании 55
1.4 Заключение по обзору литературы и постановка задач исследования 58
ГЛАВА 2. Материалы и методы 59
2.1 Получение глицеринизированных мышечных волокон 59
2.2 Приготовление «теневых» мышечных волокон 59
2.3 Получение и модификация актина 59
2.4 Выделение миозина из скелетных мышц кролика 61
2.5 Получение и модификация субфрагмента 1 миозина 61
2.6 Получение и модификация рекомбинантных - и -тропомиозина 63
2.7 Определение концентраций исследуемых белков 63
2.8 ДСН-ПААГ-электрофорез 64
2.9. Метод поляризационной флуориметрии 64
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 67
3.1 Исследование -тропомиозина с мутацией Arg91Gly 67
3.1.1 Влияние мутации Arg91Gly в -тропомиозине на пространственную организацию и гибкость актина в АТФазном цикле з
3.1.2 Влияние мутации Arg91Gly в -тропомиозине на пространственную организацию и подвижность головок миозина, а также на позицию и гибкость тропомиозина в АТФазном цикле 71
3.1.3 Обсуждение результатов по исследованию -тропомиозина с мутацией Arg91Gly 77
3.2 Исследование -тропомиозина с мутацией Gln147Pro 80
3.2.1 Влияние мутации Gln147Pro в -тропомиозине на пространственную организацию и гибкость актина в АТФазном цикле 80
3.2.2 Влияние мутации Gln147Pro в -тропомиозине на пространственную организацию и подвижность головок миозина, а также на позицию и гибкость тропомиозина в АТФазном цикле 84
3.2.3 Обсуждение результатов по исследованию -тропомиозина с мутацией Gln147Pro 90
3.3 Исследование -тропомиозина с мутацией Glu240Lys 92
3.3.1 Влияние мутации Glu240Lys в -тропомиозине на пространственную организацию и гибкость актина в АТФазном цикле 92
3.3.2 Влияние мутации Glu240Lys в -тропомиозине на пространственную организацию и подвижность головок миозина, а также на позицию и гибкость тропомиозина в АТФазном цикле 96
3.3.3 Обсуждение результатов по исследованию -тропомиозина с мутацией Glu240Lys 102
3.4 Исследование -тропомиозина с мутацией Arg244Gly 105
3.4.1 Влияние мутации Arg244Gly в -тропомиозине на пространственную организацию и гибкость актина в АТФазном цикле 105
3.4.2 Влияние мутации Arg244Gly в -тропомиозине на пространственную организацию и подвижность головок миозина, а также на позицию и гибкость тропомиозина в АТФазном цикле 108
3.4.3 Обсуждение результатов по исследованию -тропомиозина с мутацией Arg244Gly 114
Заключение 116
Выводы 117
Список литературы 118
Благодарности
