Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1 Дофаминергическая система мозга 10
1.2 Дофаминергическая нигростриатная система 11
1.2.1 Функциональная характеристика дофаминергических нейронов нигростриатной системы 12
1.2.1.1 Синтез дофамина 12
1.2.1.2 Запасание дофамина 13
1.2.1.3 Выделение дофамина
1.2.1.3.1 Докирование и прайминг везикул в активной зоне 17
1.2.1.2.1 Экзоцитоз синаптических везикул 18
1.2.1.2.2 Регуляция экзоцитоза 21
1.2.1.2.3 Эндоцитоз и траспорт везикул 21
1.2.1.4 Обратный захват и деградация дофамина 22
1.3 Морфо-функциональная организация стриатума 26
1.3.1 Кортикостриатная система 26
1.3.2. Морфологическая характеристика стриатума 26
1.3.3 Афферентная иннервация стриатума 27
1.3.4 Стриатофугальная система 28
1.3.5 Роль дофамина в регуляции моторного поведения 29
1.4. Функциональная недостаточность дофаминергической нигростриатной системы при болезни Паркинсона 31
1.4.1 Этиология и патогенез Болезни Паркинсона 31
1.4.2 Компенсаторные механизмы при болезни Паркинсона 35
1.5 Экспериментальное моделирование болезни Паркинсона 36
1.5.1 Клеточные модели болезни Паркинсона 37
1.5.2 Модели болезни Паркинсона на животных 38
ГЛАВА 2. Материалы и методы 42
2.1 Животные, моделирование болезни Паркинсона 42
2.2 Взятие материала 42
2.3 Полимеразная цепная реакция в реальном времени 43
2.4 Электрофорез белков в полиакриламидном геле 45
2.5 Вестерн-блот 45
2.6 Иммуногистохимия 46
2.7 Световая микроскопия и анализ изображений 47
2.8 Полуколичественный анализ содержания ДАТ и ВМАТ2 в терминалях аксонов стриатума 47
2.9 Выделение вентрального среднего мозга эмбрионов мыши 48
2.10 Первичная культура дофаминергических нейронов вентральной части среднего мозга эмбрионов мыши 49
2.8 Моделирование болезни Паркинсона in vitro и скрининг нейропротекторов 50
2.9 Иммуноцитохимия in vitro 50
2.10 Световая микроскопия и количественная оценка дофаминергических нейронов в первичной культуре клеток среднего мозга мыши 51
2.11. Определение содержания дофамина и его метаболитов 52
2.12 Оценка скорости обратного захвата дофамина 53
2.13 Статистическая обработка результатов 54
ГЛАВА 3. Результаты 55
3.1. Модели доклинической и ранней клинической стадии болезни Паркинсона у мышей 55
3.1.1 Содержание мРНК ДАТ и ВМАТ2 в черной субстанции 55
3.1.2 Содержание белка ДАТ и ВМАТ2 в черной субстанции и стриатуме
3.1.2 Количественный анализ ДАТ- и ВМАТ2-иммунореактивных волокон стриатума 59
3.1.3 Внутринейрональное содержание белков ДАТ и ВМАТ2 в волокнах стриатума 62
3.1.5 Содержание мРНК белков везикулярного цикла в черной субстанции 62
3.1.6 Содержание белков везикулярного цикла в черной субстанции и стриатуме 63
3.1.7 Содержание мРНК белков везикулярного цикла в стриатуме и моторной коре 65
3.2. Клеточная модель болезни Паркинсона in vitro 67
3.2.1 Морфо-функциональная характеристика дофаминергических нейронов через 24
часа после введения МФП+ 67
3.2.2 Влияние пролин-глицин-пролин-дофамина и N-докозогексаноил-дофамина на морфо-функциональное состояние дофаминергических нейронов in vitro 69
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 74
4.1. Компенсаторные процессы в нигростриатной системе при моделировании доклинической стадии болезни Паркинсона 76
4.1.1 Компенсаторные изменения экспрессии генов и содержания белков везикулярного цикла 76
4.1.2 Изменения экспрессии генов и содержания белков ДАТ и ВМАТ2 78
4.2. Компенсаторные процессы и потенциальные триггеры нарушения моторного поведения в нигростриатной системе при моделировании клинической стадии болезниПаркинсона 81
4.2.1 Изменения экспрессии генов и синтеза белков везикулярного цикла 81
4.2.2. Изменения экспрессии генов и синтеза белков ДАТ и ВМАТ2 82
4.3. Влияние дегенерации дофаминергических нейронов на экспрессию генов везикулярного цикла в стриатуме и моторной коре 83
4.4. Клеточная модель болезни Паркинсона 85
4.3.1. Развитие нейродегенеративного процесса ДА-ергических нейронов в культуре клеток. 86
4.3.2. Использование клеточной модели болезни Паркинсона для тестирования потенциальных нейропротекторов 87
Заключение 90
Выводы 91
Список сокращений 92
Список литературы 93
