Введение
Раздел 1. Перспективы системного применения аллогенных мезенхимальных стволовых клеток для коррекции стресс-индуцированных повреждений почек (обзор литературы) 17
1.1 Иммобилизация как разновидность стресс-воздействия 17
1.2 Морфофункциональная характеристика почек 20
1.3 Современные представления о патогенезе повреждения почек при стрессовом воздействии.. 25
1.4 Применение мезенхимальных стволовых клеток как перспективный метод регенерационной терапии 32
Раздел 2. Материалы и методы исследования 41
2.1 Объекты и дизайн исследования 41
2.1.1. Характеристика лабораторных животных 41
2.1.2. Экспериментальное моделирование иммобилизационного стресса и формирование экспериментальных групп 42
2.1.3. Подготовка материала для дальнейших исследований 43
2.2. Получение культуры мезенхимальных стволовых клеток костномозгового происхождения, ее идентификация и оценка пролифера-тивной активности. 48
2.3. Методы исследования 51
2.3.1. Методы изучения активности антиоксидантной системы и процессов свободно-радикального окисления 51
2.3.1.1. Определение содержания малонового диальдегида в сыворотке крови и гомогенатах почечной ткани 51
2.3.1.2. Определение активности супероксиддисмутазы (КФ1.15.1.1.) в сыворотке крови и в гомогенатах почечной ткани 53
2.3.1.3. Определение активности каталазы (КФ 1.11.1.6.) в сыворотке крови и в гомогенатах почечной ткани 55
2.3.1.4. Определение уровня восстановленного глутатиона (GSH) в сыворотке крови и в гомогенатах почечной ткани 56
2.3.1.5. Определения количества общего белка в гомогенате почечной ткани по биуретовой реакции 58
2.3.2. Методы определения индукции апоптоза 62
2.3.2.1. Оценка состояния компонентов нитроксидергической системы в сыворотке крови и в ткани почек 63
2.3.2.2. Определение уровня фрагментации ДНК в ядрах клеток почечной ткани 64
2.3.3. Оценка состояния энергетического обмена почечной ткани. 65
2.3.3.1. Оценка состояния адениловой системы почечной ткани 65
2.3.3.2. Методика определения активности лактатдегидро-геназы в почечной ткани 66
2.3.3.3. Методика определения активности лактатдегидро-геназы в сыворотке крови 66
2.3.4. Оценка функциональной активности почек 67
2.3.5. Гистоморфометрический метод исследования 68
2.4. Статистический анализ результатов 68
Раздел 3. Результаты проведенных исследований 70
3.1. Влияние введения мезенхимальных стволовых клеток на состояние компонентов антиоксидантной системы и процессы свободно радикального окисления в крови и почках при иммобилизационном стрессе 70
3.2. Влияние мезенхимальных стволовых клеток на биохимические проявления апоптоза в почечной ткани при иммобилизационном стрессе .83
3.3. Влияние мезенхимальных стволовых клеток на показатели энергетического обмена в почечной ткани и сыворотке крови крыс при иммобилизационном стрессе 92
3.4. Влияние мезенхимальных стволовых клеток на показатели функциональной активности почечной ткани при экспериментальном 24-часовом иммобилизационном стрессе 108
3.5. Влияние мезенхимальных стволовых клеток на гистоморфометри ческие изменения почечной ткани крыс при иммобилизационном стрессе 117
Раздел 4. Обсуждение полученных результатов 147
Выводы 167
Практические рекомендации 169
Список условных сокращений и обозначений 171
Список используемой литературы 172
Приложение А 203
