Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1 Актуальность разработки новых методов диагностики и лечения онкопатологии 14
1.2 Патологическая физиология онкопатологии 15
1.3 Иммунотерапия в онкологии 17
1.4 Протоонкогены и гены-супрессоры опухолевого роста 20
1.5 Ген KLOTHO и продукты его экспрессии 24
Глава 2. Методические вопросы исследования 37
2.1 Культуры клеток и их культивирование 37
2.2 Генетические конструкции: экстракция ДНК, качественный и количественный ПЦР-анализ 39
2.3 Секвенирование 40
2.4 Трансфекция 42
2.5 Контроль гиперэкспрессии 43
2.6 Кривые роста и подсчет количества клеток 44
2.7 МТТ-тест 47
2.8 Оценка интенсивности восстановления окисленной формы резазурина 49
2.9 Определение активности внутриклеточной лактатдегидрогена 50
2.10 Оценка интенсивности синтеза ДНК 51
2.11 Оценка активности ферментов семейства каспаз 52
2.12 Статистическая обработка данных 53
2.13 Этические вопросы 53
Глава 3. Исследование эффектов действия гиперэкспрессии гена KLOTHO на культивируемую линию опухолевых клеток эмбриональной рабдомиосаркомы человека 55
3.1 Исследование кривых роста клеток линии Rd 55
3.2 Оценка результатов МТТ-теста 57
3.3 Оценка интенсивности биоредукции резазурина клетками Rd 59
3.4 Исследование общей внутриклеточной лактатдегидрогеназы в клетках линии Rd 61
3.5 Оценка интенсивности синтеза ДНК в клетках линии Rd 62
3.6 Оценка активности апоптотических процессов 63
3.7 Заключение 64
Глава 4. Исследование эффектов действия гиперэкспрессии гена KLOTHO на культивируемую линию опухолевых клеток глиобластомы человека 71
4.1 Исследование кривых роста клеток линии A-172 71
4.2 Оценка результатов МТТ-теста 73
4.3 Оценка интенсивности биоредукции резазурина клетками A-172 74
4.4 Исследование общей внутриклеточной лактатдегидрогеназы в клетках линии A-172 75
4.5 Оценка интенсивности синтеза ДНК в клетках линии A-172 76
4.6 Оценка активности апоптотических процессов 77
4.7 Заключение 78
Глава 5. Исследование эффектов действия гиперэкспрессии гена KLOTHO на культивируемую линию опухолевых клеток рака ободочной кишки человека 84
5.1 Исследование кривых роста клеток линии Caco-2 84
5.2 Оценка результатов МТТ-теста 86
5.3 Оценка интенсивности биоредукции резазурина клетками Caco-2 88
5.4 Исследование общей внутриклеточной лактатдегидрогеназы в клетках линии Caco-2 89
5.5 Оценка интенсивности синтеза ДНК в клетках линии Caco-2 90
5.6 Оценка активности апоптотических процессов 92
5.7 Заключение 93
Глава 6. Исследование эффектов действия гиперэкспрессии гена KLOTHO на выделенные культивируемые клетки глиобластомы человека 100
6.1 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-1 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 101
6.2 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-2 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 102
6.3 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-3 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 103
6.4 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-4 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 105
6.5 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-5 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 106
6.6 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-6 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 108
6.7 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-7 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 109
6.8 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-8 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 111
6.9 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-9 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 112
6.10 Исследование жизнеспособности клеток линии EGL-10 под действием индуцированной гиперэкспрессии секретируемой формы Klotho 113
6.11 Заключение 115
Общее заключение 118
Список использованной литературы 129
