Введение
2. Литературный обзор 7
2.1. Белки теплового шока, их индукторы и классификация. 7
2.2. Структура и свойства Hsp70 16
2.3. Молекулярные механизмы апоптоза и протективная функция Hsp70 20
2.4. Экспрессия белков теплового шока в опухолевых клетках 29
2.5. Hsp70 и иммуногенность опухолей 31
2.6. Роль шаперонов в нейропатологиях 33
3. Материалы и методы 45
3.1. Клеточные линии и их культивирование 45
3.2. Животные 46
3.3. Белки 46
3.4. Антитела. 46
3.5. Электрофоретические методы . 47
3.6. Очистка Hsp70 для иммунизации и использования в опытахпо введению в клетки и/или в культуральную среду. 47
3.7. Иммунохимические методы 49
3.8. Конфокальная микроскопия 50
3.9. Filter Trap Assay 50
3.10. Protein Interaction Assay (PIA) 51
4. Результаты 52
4.1. Работа шаперонного аппарата клетки в процессе реакции на тепловой стресс 52
4.2. Защитная роль Hsp70 в опухолевых клетках . 64
4.2.1. Диагностикум для определения концентрации Hsp70 в биологических жидкостях. 64
4.2.2. Анализ экспрессии белков-шаперонов, Hsp70 и Hdj1, в опухолевых клетках человека. 66
4.2.3. Зависимость устойчивости опухолевых клеток к индукторам апоптоза от уровня экспрессии Hsp70.
4.2.4. Вмешательство Hsp70 в сигнальные пути апоптоза, подавление действия эффекторных каспаз 94
4.2.5. Комплексы шаперона Hsp70 с членами семейства NF-KB.
4.2.6. Поверхностный белок клеток рабдомиосаркомы крыс, р58, ответственный за метастазирование в легкие, ассоциирован с
4.3.5. Введение животным препарата очищенного Hsp70 приводит к предотвращению формирования опухолевых узлов влегких при введении опухолевых клеток. 104
4.3. Hsp70 во внеклеточном пространстве.
4.3.1. В экспорт Hsp70 вовлечены сигнальные механизмы клетки.
4.3.2. Примеры интернализации белка клетками разного тканевого происхождения.
4.3.3. Защитные свойства экзогенного Hsp70.
4.4. Hsp70 и нейродегенеративные заболевания .
4.4.1. Формирование агрегатов мутантных белков в нервных клетках приводит к их гибели
4.4.2. Hsp70, проникая в нервные клетки, подавляет процесс образования агрегатов и отменяет апоптоз
4.4.3. Hsp70, введенный животным, корректирует поведение бульб- эктомированных животных (модель болезни Альцгеймера).
4.5. Защитное действие Hsp70 в моделях психо-физического стресса
Обсуждение 143
Выводы 152
Список литературы 155
