Введение
1 Обзор литературы 8
1.1 Роль инозитол (1,4,5)-трисфосфата(ІпвРз) в передаче внутриклеточного сигнала. 8
1.2 Структура и функции рецептора InsP3 11
1.2.1 Локализация и типы рецептора ІПБРЗ 11
1.2.2 Молекулярная структура InsP3R 12
1.2.3 Функциональные свойства InsP3R 16
1.2.4 Факторы, влияющие на активацию InsPzR. 18
1.3 Рианодиновый рецептор 19
1.4 СаМ- кальций- зависимый белок 23
1.4.1 Структура и функции СаМ 23
1.4.2 Действие СаМ на вход Са2+через потенциал -зависимые Са2+- каналы 24
1.4.3 Действие СаМ на выход Са2+ через рианодиновые рецепторы(РуРз) 25
1.4.4 Действие СаМ на ІПБРЗ -индуцированный вход кальция 25
1.5 Депо-управляемый вход кальция в клетку. 26
1.6 Каналы, активируемые выбросом кальция: CRAC . 27
1.7 Каналы семейства TRP. 29
1.8 Гипотезы о механизме регуляции
депо-зависимых кальциевых каналов. 32
1.9 Конформационное сопряжение. 32
1.10 Низкопроводящие кальциевые каналы Imin 34
1.11 Регистрация внутриклеточной концентрации
кальция с помощью флуоресцентных зондов. 39
2 Материалы и методы 41
2.1 Клетки 41
2.2 Материалы 42
2.3 Получение рекомбинантных бакуловирусов. 43
2.4 Регистрация ионных токов и обработка экспериментальных данные 44
2.5 Экспрессия и очистка рекомбинантного белка InsP3R-N-His 45
2.6 Анализ связывания с [3Н]1пэРз 46
2.7 Анализ связывания с [125I] ShPIP2 47
2.8 Эксперименты на бислойной липидной мембране 47
2.9 Регистрация внутриклеточной концентрации кальция 48
3 Результаты и обсуждение 51
3.1 Специфическое связывание 1ПБРЗ& С ІПБРЗ, аденофостином A (AdА), а также антагонистом InsP3R - водорастворимым PIP2. 51
3.2 Роль лиганд-связывающего домена ІпзРзР. в регуляции активности Im-m каналов . 57
3.3 Роль высоко-аффинного кальций-зависимого сайта связывания с СаМ в регуляторном домене ІпзРзК. 60
3.3.1 Мутация W1577А в InsP3R крысы отменяет кальций-зависимое взаимодействие с СаМ, 62
3.3.2 Модулирование активности рекомбинантного InsP3R цитозольным кальцием. 64
3.3.3 Роль кальмодулина в модулировании активности рекомбинантного InsP3R цитозольным кальцием. 65
3.3.4 Ингибирование InsP3R кальмодулином. 70
Выводы 72
Благодарности 73
Список работ, опубликованных
По теме диссертации 74
Список литературы 75
