Введение
2. Обзор литературы 11
2.1 Регуляция клеточного метаболизма в условиях гипоксии 11
2.1.1 Механизмы детекции уровня кислорода 11
2.1.2 Транскрипционный фактор HIF 14
2.1.3 Структура HIF-1 17
2.1.4 Механизмы регуляции HIF-1 19
2.1.5 Изоформы HIF- 26
2.2 Гипоксия и злокачественные новообразования 28
2.2.1 Гипоксия и РМЖ 34
2.3 Воздействие эстрогенов на клетки-мишени. Рецепторы эстрогенов 37
2.3.1 Сигнальные пути рецепторов эстрогенов. 38
2.3.2 Современные представления о возникновении гормональной резистентности РМЖ . 40
2.4 Гипоксия и гормональная резистентность РМЖ 46
2.5 Гипоксия и эпителиально-мезенхимальный переход 49
2.5.1 ЭМП и рак 49
2.5.2 Гипоксия и индукция ЭМП 50
2.6 ЭМП и гормональная зависимость клеток РМЖ 53
3 Материалы и методы
55 Список реактивов и производителей 55
Оборудование и приборы 56
3.1 Культивирование клеток 57
3.2 МТТ-тест 58
3.3 Получение клеточных экстрактов и иммуноблоттинг 59
3.4 Транзиентная трансфекция 60
3.5 Трансдукция клеток лентивирусной конструкцией 63
3.6 Использование специфического ингибитора -катенина ICG-001 63
3.7 Использование активатора -катенина CHIR 99021 64
4 Результаты и обсуждение 65
4.1 Сравнительный анализ выживаемости в условиях гипоксии клеток эстрогензависимого и эстрогенрезистентного рака молочной железы 65
4.1.1 Рост клеток MCF-7 и HBL-100 в условиях гипоксии 65
4.1.2 Индукция HIF-1 под действием гипоксии 67
4.1.3 Влияние гипоксии на содержание и активность рецептора эстрогенов ER 68
4.2 Гипоксия и эстрогеннезависимые сигнальные пути 72
4.2.1 Влияние гипоксии на уровень HER2/Neu 72
4.2.2 Гипоксия и белок Snail1. Значение Snail1 в регуляции выживаемости клеток в
условиях гипоксии 74
4.2.3. Взаимоотношения между Snail1 и ER 80
4.2.4. Участие кадхерин-катенинового сигнального пути в реакции клеток на гипоксию 5 Заключение 88
Выводы 92
