Введение
1 Обзор литературы 7
1.1 Молекулярная организация вируса гепатита С 9
1.2 Строение и функции вирусных белков 10
1.3 Особенности ВГС-инфекции 26
1.4 Антигенная структура белков ВГС и методы картирования 35
2 Материалы и методы 49
2.1 Иммуногистохимическая детекция белков 49
2.1.1 Пациенты 49
2.1.2 Исход ОГС 50
2.1.3 Морфологический анализ 50
2.1.4 Выделение МКА из асцитных жидкостей 51
2.1.5 Моноклональные антитела 50
2.1.6 Определение концентрации белка 51
2.1.7 Иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание 51
2.2 Картирование антигенных детерминант белков ВГС 53
2.2.1 Фаговая библиотека 53
2.2.2 Аффинный отбор 53
2.2.3 Трансдукция клеток E.coli фагами 54
2.2.4 Иммуноскрининг 54
2.2.5 Выделение одноцепочечной фаговой ДНК и секвенирование 55
2.2.6 Анализ результатов секвенирования 55
2.3 Изучение иммуногенности отдельных детерминант 56
2.3.1 Иммунизация мышей 56
2.3.2 Определение активности антител в сыворотках мышей 57
2.3.3 Реакция блаеттрансформации спленоцитов 57
2.4 Изучение антигенных свойсв отдельных антигенных детерминант.. 58
2.4.1 Реакция иммуно-ДОТа с сыворотками больных ГС 58
2.4.2 Приготовление лизата E.coli 58
2.4.3 Истощение сывороток больных 59
2.4.4 Иммуноферментный анализ. Непрямой ИФА 59
2.4.5 Сендвич-ИФА№1 59
2.4.6 Сендвич-ИФА №2 60
2.4.7 Статистическая обработка результатов 60
3 Результаты 62
3.1 Выявление натуральных антигенных детерминант в печени больных ОГС 62
3.2 Картирование антигенных детерминант 70
3.3 Изучение иммуногенных свойств отдельных детерминант 80
3.4 Изучение антигенных свойств отдельных детерминант 83
4 Обсуждение результатов 92
Выводы 109
Список цитированной литературы 109
