Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Некоторые аспекты организации и эволюции генома млекопитающих 13
1.2. Гетерохроматиновые районы в хромосомах млекопитающих 16
1.2.1. Конститутивный гетерохроматин 16
1.2.2. Центромерные районы 20
1.2.3. Теломерные районы 26
1.2.4. Ядрышкообразующие районы 27
1.3. Повторяющиеся последовательности ДНК и хромосомные перестройки 32
1.3.1. Мобильные элементы 33
1.3.2. Интерстициальные теломерные повторы 34
1.3.3. Сегментные дупликации 36
1.4. Эволюционная консервативность Х-хромосомы млекопитающих 38
1.5. Микродисекционные ДНК-пробы в хромосомном пэйнтинге 40
1.6. Группа обыкновенных полевок рода Microtus (отряд Rodentia) 43
1.6.1. Систематическое положение и филогенетические отношения внутри группы 44
1.6.2. Кариологические характеристики обыкновенных полевок 45
Глава 2. Материалы и методы. 49
2.1. Животные 49
2.2. Получение культур первичных фибробластов легких 49
2.3. Фиксация клеток. 50
2.4. Приготовление препаратов метафазных хромосом 51
2.5. Дифференциальное окрашивание метафазных хромосом 51
2.5.1. GTG-дифференциальное окрашивание хромосом 51
2.5.2. Ag-окрашивание 52
2.5.3. Последовательное окрашивание хромосом разными методами ...52
2.5.4. С-дифференциальное окрашивание 52
2.5.5. GTG-окрашивание хромосом для микродиссекции 53
2.6. Получение микродиссекционных ДНК-проб 53
2.7. Введение метки в ДИК микродиссекционных ДНК-проб 54
2.8. ДНК-проба для детекции рДНК 54
2.9. Флуоресцентная in situ гибридизация 54
2.9.1. Супрессионная in situ гибридизация 55
2.10. Детекция на цитологических препаратах меченых ДНК-проб 56
2.10.1. Детекция ДНК-проб, меченных биотин-16-дУТФ 56
2.10.2. Детекция ДНК-проб, меченых дигоксигенин-11-дУТФ 56
2.10.3. Совместное выявление двух гаптен-меченых ДНК-проб 57
2.11. Микроскопический анализ препаратов метафазных хромосом 57
Глава 3. Результаты 58
3.1. Локализация ядрышкообразующих районов в хромосомах обыкновенных полевок 58
3.1.1. Локализация ЯО-районов с применением Ag-окрашивания хромосом 58
3.1.2. Локализация генов рибосомных РНКс применением FISH 62
3.1.3. Сравнение хромосомной локализации ЯО-районов у разных видов 64
3.2. Анализ реорганизации гомологов хромосом 5 и 8 М. arvalis "obscurus" при формировании дополнительных блоков гетерохроматина и в процессе эволюции видов 66
3.2.1. Характеристика дополнительных блоков гетерохроматина перестроенных гомологов хромосом 5 и 8 М arvalis "obscurus" 66
3.2.2. Районоспецифические ДНК-пробы хромосом M.arvalis «obscurus» 69
3.2.3. CISS-гибридизация ДНК-проб гетерохроматиновых блоков 5RC и 8RC 70
3.2.4. Сравнение организации эухроматиновых районов хромосом 8, 8R M.arvalis «obscurus» и ихгомеологов 74
3.2.5. Сравнение организации эухроматиновых районов хромосом 5 и 5KM.arvalis "obscurus" 75
3.2.6. Сравнение организации эухроматиновых районов хромосомы 5 M.arvalis "obscurus" и еегомеологов 77
3.3. Распределение в хромосомах полевок подрода Microtus кластеров повторяющихся последовательностей ДНК, выявленных
в разных вариантах FISH 78
3.3.1. CISS-гибридизация ДНК-проб гетерохроматинового блока 5RC сметафазными хромосомами полевок 78
3.3.2. CISS-гибридизация ДНК-пробы гетерохроматинового блока 8RC с метафазными хромосомами полевок 82
3.3.3. CISS-гибридизация ДНК-пробы р-плеча хромосомы 8R с метафазными хромосомами полевок; 84
3.3.4. Одновременная FISH ДНК-проб разных гетерохроматиновых блоков с метафазными хромосомами полевок 85
3.3.5. Межвидовые различия обыкновенных полевок по характеру распределения кластеров повторяющихся последовательностей, гомологичных ДНК гетерохроматиновых блоков M.arvalis «obscurus» 87 3.4. Анализ организации эухроматиновых районов Х-хромосом обыкновенных полевок 90
3.4.1. Установление гомологии эухроматиновых районов в Х-хромосомах полевок 92
3.4.2. Анализ возможных перестроек эухроматиновых районов Х-хромосом в эволюции обыкновенных полевок 94
3.4.3. Анализ локализации точек разрывов-воссоединений предполагаемых инверсий в ходе реорганизации Х-хромосом полевок 96
Глава 4. Обсуждение... 99
4.1.Кластеры гомологичных повторяющихся последовательностей ДНК в хромосомах обыкновенных полевок 99
4.2.Повторяющиеся последовательности ДНК и дивергенция видов обыкновенных полевок 101
4.3. ЯО-районы и кластеры повторяющихся последовательностей ДНК в хромосомах обыкновенных полевок 105
4.4. Эволюция ЯО-районов обыкновенных полевок 109
4.5. Транспозиции центромер в хромосомах полевок 113
4.5. Эволюция Х-хромосом обыкновенных полевок 116
Заключение 120
Выводы ...123
Список литературы пт7 125
