Введение
2. Литературный обзор 11
2.1. Общие сведения о стрептококках
2.2. Факторы патогенности стрептококков группы В 13
2.2.1. р антиген стрептококков группы В 14
2.2.2. Семейство Alp белков СГВ 16
2.2.3. С5а пептидаза стрептококков группы В 18
2.2.4. Другие факторы патогенности стрептококков группы В 20
2.3. Сведения о липопротеинах семейства Lral 24
2.3.1. Особенности строения липопротеинов грамположительных бактерий 26
2.3.2. АТФ-связывающие транспортные системы АВС-типа 27
2.3.3. Роль Мп транспортных систем АВС-типа в вирулентности 31
2.3.4. Другие функции липопротеинов семейства Lral 33
2.3.5. Липопротеины семейства Lral - компоненты вакцин против стрептококков 34
3. Материалы и методы 37
3.1. Бактериальные штаммы, плазмиды, культуральные среды и условия роста 37
3.2. Выделение хромосомной ДНК 38
3.3. Выделение плазмидной ДНК 39
3.4. Выделение ДНК из агарозного геля 39
3.5. Рестрикция и лигирование ДНК 40
3.6. Электрофорез ДНК в агарозном геле 40
3.7. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 40
3.8. Трансформация Escherichia col 42
3.9. Гибридизационный анализ ДНК 42
3.10. Создание фаговой библиотеки генома СГВ 43
3.11. Секвенирование ДНК 43
3.12. Электропорация стрептококков группы В 44
3.13. Метод адгезии СГВ на клетках вагинального эпителия 45
3.14. Методы выделения и очистки рекомбинантных белков 46
3.15. Электрофорез белков 47
3.16. Изучение иммунного ответа 47
3.17. Определение константы связывания антител к рекомбинантному белку ScaAB 48
3.18. Модельная СГВ инфекция 48
3.19. Исследование протективных свойств белков 49
3.20. Опсонофагоцитарная реакция макрофагов мыши с СГВ 49
3.21. Компьютерный анализ 51
4. Результаты и обсуждение 52
4.1. Клонирование гена возможного фактора адгезии СГВ 52
4.2. Компьютерный анализ нуклеотидной последовательности гена scaAB 57
4.3. Сравнительный анализ строения оперонов ABC-транспортных систем 62
4.4. Получение мутантов СГВ по гену scaAB 63
4.5. Анализ штаммов СГВ разных серотипов на присутствие гена scaAB 67
4.6. Получение рекомбинантного белка ScaAB 68
4.7. Оптимизация экспрессии белка ScaAB в рекомбинантном штамме Е. соН 74
4.8. Оценка титра антител к рекомбинантному белку ScaAB в сыворотке мышей после модельной СГВ инфекции
4.9. Изучение иммунного ответа на рекомбинантный белок ScaAB 78
4.10. Изучение протективных свойств рекомбинантного белка ScaAB
4.11. Исследование протективности иммунной сыворотки к белку ScaAB на
суточном слое мышиных макрофагов
5. Заключение
6. Выводы
7. Список литературы
8. Благодарности
