Введение
2 Обзор литературы 13
2.1 Исторические данные, распространение вируса ВД КРС 13
2.2 Течение и симптомы болезни 15
2.3 Пути передачи инфекции 16
2.4 Патогенез 17
2.5 Патогенность вируса 19
2.6 Классификация 20
2.6.2 Морфология и характеристика вириона 20
2.6.3 Организация генома и репликация 20
2.6.4 Протеины 23
2.6.5 Устойчивость 24
2.6.6 Антигенная вариабельность 24
2.7 Диагностика ВД КРС 24
2.8 Патологоанатомические изменения 25
2.9 Профилактика и лечение ВД 26
2.10 Заключение по обзору литературы 28
3 Собственные исследования 31
3.1 Материалы и оборудование 31
3.1.1 Патологический и биоматериал 31
3.1.2 Культура клеток 31
3.1.3 Коммерческие наборы для исследования 31
3.1.4 Средства измерений 33
3.1.5 Реактивы для молекулярно-генетических исследований 34
3.1.6 Посуда и материалы 37
3.1.7 Програмное обеспечение 38
3.1.8 Препараты для лечения животных 38
3.2 Методы исследования 39
3.2.1 Проведение серологического мониторинга 39
3.2.2 Эпизоотологическое обследование 42
3.2.3 Культивирование вируса на культуре клеток 43
3.2.4 Проведение ПЦР анализа 44
3.2.5 Положительные контроли 52
3.2.6 Секвенирование амплифицированных фрагментов генома 52
3.2.7 Определение нуклеотидной последовательности методом капиллярного электрофореза 53
3.3 Результаты исследований 55
3.3.1 Идентификация патологических агентов в респираторном симптомокомплексе у крупного рогатого скота в хозяйствах 62
3.3.2 Выделение вируса на культуре клеток 71
3.3.3 Выбор специфических праймеров для амплификации и детекции вируса ВД КРС 74
3.3.4 Подбор оптимальных условий амплификации 75
3.3.5 Введение контрольных образцов 77
3.3.6 Анализ специфичности работы олигонуклеотидов 80
3.3.7 Анализ чувствительности методики 81
3.3.8 Эффективность ПЦР 83
3.3.9 Исследование биологического материала 86
3.3.10 Секвенирование образцов, содержащих РНК вируса ВД КРС 86
3.3.11 Филогенетический анализ вируса ВД КРС 86
3.3.12 Интерпретация результатов испытания с использованием ресурса NCBI/BLAST 96
3.3.13 Схема оздоровления хозяйства 97
4. Обсуждение результатов исследований 114
5. Заключение 118
Перечень сокращений и условных обозначений 122
Список литературы 124
Приложения 147
