Введение
1. Обзор литературы 13
1.1. Существование двух форм Culex pipiens pipiens 13
1.1.1. История открытия двух форм Culex pipiens pipiens 13
1.1.2. Основные биологические и экологические признаки С. p. pipiens и С. p. molestus 15
1.1.2.1. Автогенность - неавтогенность 15
1.1.2.2. Стеногамность - эвригамность 18
1.1.2.3. Гомодинамность - гетеродинамность 19
1.1.2.4. Прокормители 20
1.1.2.5. Местообитания 20
1.1.3. Гибридизация между С. p. pipiens и С. p. molestus 21
1.1.4. Таксономический статус С. p. pipiens и С. p. molestus . 27
1.2. Culex torrentium 32
1.3. Молекулярные методы популяционной генетики, систематики и филогении 34
1.3.1. Изоферментный анализ 34
1.3.2. Иммунологический анализ 36
1.3.3. ДНК-ДНК гибридизация 36
1.3.4. RFLP-анализ 36
1.3.5. Секвенирование 37
1.3.6. RAPD-анализ 38
1.4. Объекты молекулярной систематики и филогении 42
1.4.1. Митохондриальная ДНК 42
1.4.2. Рибосомальная ДНК 44
2. Материал и методы 48
2.1. Материал 48
2.2. Методы 48
2.2.1. Выделение ДНК 48
2.2.2. RAPD-ПЦР 48
2.2.3. Поиск специфичных RAPD - фрагментов 54
2.2.4. Клонирование и секвенирование специфичных RAPD - фрагментов 55
2.2.5. SCAR-ПЦР 55
2.2.6. Рестрикционный анализ участка митохондриального гена субъединицы I цитохромоксидазы с 56
2.2.7. Амплификация ITS2 регионов рибосомальной ДНК . 58
2.2.8. Амплификация второго интрона гена ацетилхолинэстеразы 2 59
2.2.9. Секвенирование участка митохондриального гена субъединицы I цитохромоксидазы с и второго интрона гена ацетилхолинэстеразы 2 59
2.2.10. RAPD-полиморфизм 60
3. Результаты 61
3.1. Молекулярно - генетические маркеры для идентификации представителей комплекса Cidex pipiens 61
3.1.1. RAPD - маркеры 61
3.1.2. SCAR-маркеры 64
3.1.3. ITS2 регионы рибосомальной ДНК 68
3.1.4. Участок гена субъединицы I цитохромоксидазы с 71
3.1.5. Второй интрон гена ацетилхолинэстеразы 2 74
3.2. Полиморфизм RAPD - маркеров в природных популяциях С. p. pipiens, С. p. molestus, С. torrentium 74
4. Обсуждение CLASS 85
4.1. Использование молекулярно - генетических маркеров для идентификации представителей комплекса Culex pipiens 85
4.1.1. RAPD-маркеры 85
4.1.2. SCAR-маркеры 86
4.1.3. ITS2 регионы рибосомальной ДНК 86
4.1.4. Участок гена субъединицы I цитохромоксидазы с 88
4.1.5. Второй интрон гена ацетилхолинэстеразы 2 89
4.2. Генетическая дифференциация популяций С. p. pipiens, С. p. molestus и С. torrentium умеренных широт 91
4.3. Распространение С. torrentium и С. p. pipiens на территории Томской области и Республики Казахстан 97
Выводы 101
Литература
