Введение
Глава 1 Обзор литературы 17
1.1 Интерлейкин 2 и интерферон-гамма как ключевые факторы иммунной защиты против Mycobacterium tuberculosis 17
1.2 Рецептор-опосредованный путь активации Т-лимфоцитов 23
1.2.1 Структура «иммунологического синапса» и его роль в активации T-лимфоцитов 23
1.2.2 Основные транскрипционные факторы рецептор-опосредованного пути активации Т-лимфоцитов 31
1.2.2.1 Транскрипционный фактор NF-кВ и его роль в иммунном ответе 31
1.2.2.2 Транскрипционный фактор NFAT и его роль в иммунном ответе 38
1.2.2.3 Транскрипционный фактор АР-1 и его роль в иммунном ответе 42
1.3 Цитокин-опосредованный путь активации Т-лимфоцитов 47
1.3.1 Роль цитокинов семейства интерлейкина 12 и их рецепторов в активации Т-лимфоцитов 48
1.3.2 Основные компоненты внутриклеточной JAK-STAT-сигнализации и роль транскрипционного фактора T-bet в цитокин-опосредованной активации Т-лимфоцитов 53
1.3.2.1 Тирозиновые киназы семейства JANUS 53
1.3.2.2 Транскрипционные факторы STAT 55
1.3.2.3 Транскрипционный фактор T-bet 58
1.3.2.4 Алгоритм цитокин-опосредованной активации Т-лимфоцитов 60
Глава 2 Материал и методы исследования 66
2.1 Объект исследования 66
2.2 Материал исследования 70
2.3 Дизайн исследования 70
2.4 Методы исследования 72
2.4.1 Выделение мононуклеарных лейкоцитов из крови 72
2.4.2 Выделение лимфоцитов из взвеси мононуклеарных лейкоцитов 73
2.4.3 Подсчет количества и определение жизнеспособности лимфоцитов в суспензии 73
2.4.4 Специфическая индукция выделенных клеток крови in vitro 74
2.4.5 Проточная цитофлуориметрия 83
2.4.5.1 Определение поверхностных молекул CD3, CD28 и внутриклеточного IL-2 лимфоцитов 83
2.4.5.2 Определение поверхностной молекулы CTLA4 на CD3-лимфоцитах 85
2.4.5.3 Определение внутриклеточных транскрипционных факторов NF-B, АР-1, NFAT1, NFAT2 и T-bet в CD3-лимфоцитах 86
2.4.5.4 Определение рецепторных молекул IL-12R2, gp130, WSX1 на CD3-лимфоцитах 87
2.4.5.5 Определение внутриклеточного IFN в CD3-лимфоцитах 88
2.4.6 Иммуноферментный анализ 89
2.4.6.1 Исследование базальной и CD3/CD28-индуцированной секреции IL-2 лимфоцитами 90
2.4.6.2 Исследование базальной и BCG-индуцированной секреции IL-12(p70) лимфоцитами 91
2.4.6.3 Исследование BCG-индуцированной секреции IL-12(p35) и IL-12(p40) лимфоцитами 92
2.4.6.4 Исследование базальной и BCG-индуцированной секреции IL-27 лимфоцитами 92
2.4.6.5 Определение содержания белков транскрипции STAT1 и STAT4 в лизатах IL-12/IL-27-индуцированных лимфоцитов 93
2.4.6.6 Определение содержания тирозиновых киназ JAK1, JAK2, TYK2 в лизатах IL-12/IL-27-индуцированных лимфоцитов 94
2.4.6.7 Исследование базальной и IL-12/IL-27-индуцированной секреции IFN лимфоцитами методом иммуноферментного анализа 94
2.4.7 Статистический анализ результатов 95
Глава 3 Результаты собственных исследований 96
3.1 Показатели функциональной активности CD3/CD28-индуцированных in vitro лимфоцитов у больных туберкулезом легких 96
3.1.1 Количество лимфоцитов, экспрессирующих молекулы CD3 и CD28, после CD3/CD28-индукции клеток in vitro у больных туберкулезом легких 96
3.1.2 Содержание CD3/CD28-индуцированных in vitro лимфоцитов, экспрессирующих молекулу CTLA4, у больных туберкулезом легких 99
3.1.3 Количество CD3/CD28-индуцированных in vitro Т-лимфоцитов, содержащих белки транскрипции NF-B, AP-1, NFAT, у больных туберкулезом легких 103
3.1.3.1 Количество CD3/CD28-индуцированных in vitro Т-лимфоцитов, содержащих белок транскрипции NF-B (p50), у больных туберкулезом легких 103
3.1.3.2 Количество CD3/CD28-индуцированных in vitro Т-лимфоцитов, содержащих белок транскрипции АР-1(c-JUN), у больных туберкулезом легких 106
3.1.3.3 Количество CD3/CD28-индуцированных in vitro Т-лимфоцитов, содержащих белки транскрипции NFAT, у больных туберкулезом легких 108
3.1.4 Количество лимфоцитов с внутриклеточным содержанием IL-2 после CD3/CD28-индукции клеток in vitro у больных туберкулёзом лёгких 114
3.1.5 Субпопуляционный состав CD3/CD28-индуцированных in vitro Т-лимфоцитов крови у больных туберкулёзом лёгких 115
3.1.6 Уровень базальной и CD3/CD28-индуцированной секреции in vitro IL-2 лимфоцитами у больных туберкулезом легких 119
3.2 Секреция in vitro интерлекинов семейства 12 в культуре мононуклеарных лейкоцитов у больных туберкулезом легких 121
3.2.1 Уровень базальной и BCG-индуцированной секреции in vitro IL-12(p70) мононуклеарными лейкоцитами у больных туберкулезом легких 121
3.2.2 Уровень BCG-индуцированной секреции in vitro IL-12(p35) и IL-12(p40) мононуклеарными лейкоцитами у больных туберкулезом легких 122
3.2.3 Уровень базальной и BCG-индуцированной секреции in vitro IL-27 мононуклеарными лейкоцитами у больных туберкулезом легких 124
3.3 Показатели функциональной активности IL-12/IL-27-индуцированных in vitro лимфоцитов у больных туберкулезом легких 125
3.3.1 Количество IL-12/IL-27-индуцированных in vitro лимфоцитов, экспрессирующих рецепторные молекулы к цитокинам семейства интерлейкина 12, у больных туберкулезом легких 125
3.3.1.2 Количество IL-12/IL-27-индуцированных in vitro Т-лимфоцитов, экспрессирующих рецепторные молекулы gp130 и WSX1, у больных туберкулезом легких 127
3.3.2 Концентрация тирозинкиназ JAK1, JAK2 и TYK2 в лизатах IL-12/IL-27-индуцированых in vitro лимфоцитов у больных туберкулезом легких 136
3.3.3 Концентрация белков транскрипции STAT1 и STAT4 в лизатах IL-12/IL-27-индуцированных in vitro лимфоцитов у больных туберкулезом легких 136
3.3.4 Количество IL-12/IL-27-индуцированных in vitro Т-лимфоцитов, содержащих белок транскрипции T-bet, у больных туберкулезом легких 138
3.3.5 Количество IL-12/IL-27-индуцированных in vitro лимфоцитов с внутриклеточным содержанием IFN у больных туберкулезом легких 141
3.3.6 Уровень базальной и IL-12/IL-27-индуцированной секреции in vitro IFN лимфоцитами у больных туберкулезом легких 145
Глава 4 Обсуждение результатов исследования 147
4.1 Патогенетические факторы нарушений рецептор-опосредованной активации Т-лимфоцитов 149
4.2 Патогенетические факторы нарушений цитокин-опосредованной активации Т-лимфоцитов 173
Выводы 193
Список принятых сокращений 195
Список литературы 198
