Введение
Глава 1. Обзор литературы. Современные представления о молекулярных механизмах, учавствующих в регуляции апоптоза клеток 11
1.1. Феноменология апоптотической гибели клеток 12
1.1.1. Молекулярные механизмы реализации апоптоза 12
1.1.2. > Редокс-регуляция програмированной клеточной гибели 21
1.2. Пути активации и мишени воздействия транскрипционных факторов 24
1.2.1. Роль транскрипционного фактора NF-kB в
жизнедеятельности клетки 24
1.2.1.1. Классический, альтернативный и другие пути активации транскрипционного фактора NF-kB 24.
1.2.1.2. Исходы активации NF-kB 28
1.2.2. Транскрипционный фактор р53 31
1.2.2.1. Модели р53 активации 31
1.2.2.2. Нижележащие мишени р53 активации 34
1.3. Роль белков семейства Вс1-2 в реализации апоптотической программы клетки 38
1.3.1. Антиапоптотические белки-регуляторы
программированной клеточной гибели 39
1.3.2. Проапоптотические белки семейства Вс1-2,
участвующие в регуляции апоптотической гибели клеток 41
1.3.3. Молекулярные основы взаимодействия между подклассами протеинов семейства Вс1-2 45
Заключение 49
Глава 2. Материал и методы исследования 52
2.1. Материал исследования 52
2.1.1 Экспериментальный блок исследования 53
2.1.2. Клинический блок исследования 54
2.2. Методы исследования 55
2.2.1. Выделение и культивирование мононуклеарных лейкоцитов венозной крови
2.2.2. Оценка реализации апоптоза мононуклеарных лейкоцитов крови с использованием метода проточной лазерной цитофлуориметрии 56
2.2.3. Определение апоптотически измененных мононуклеарных лейкоцитов с использованием TUNEL-метода
2.2.4. Оценка митохондриального трансмембранного потенциала мононуклеарных лейкоцитов крови 59
2.2.5. Оценка продукции активных форм кислорода мононуклеарными лейкоцитами крови 60
2.2.6. Оценка количества TNF R1 -позитивных мононуклеарных лейкоцитов крови 62
2.2.7. Оценка продукции TNF-a мононуклерными лейкоцитами крови 62
2.2.8. Оценка экспрессии РНК генов белков-регуляторов апоптоза в мононуклеарных лейкоцитах крови 63
2.2.9. Оценка уровня факторов транскрипции и белков-регуляторов апоптоза в мононуклеарных лейкоцитах крови 70
2.2.10. Статистический анализ результатов 71
Глава 3. Результаты собственных исследований 72
3.1.Особенности реализации программированной гибели мононуклеарных лейкоцитов крови при окислительном стрессе in vitro 72
3.1.1. Особенности продукции активных форм кислорода мононуклеарными лейкоцитами крови в условиях" окислительного стресса in vitro 72
3.1.2. Изменения количества апопточески измененных клеток в культуре мононуклеарных лейкоцитов крови в условиях окислительного стресса in vitro 74
3.1.3. Изменения количества клеток со сниженным митохондриальным трансмембранным потенциалом в культуре мононуклеарных лейкоцитов крови в услвиях окислительного стресса in vitro 75
3.2. Особенности программированной гибели мононуклеарных лейкоцитов крови при острых воспалительных заболеваниях 76
3.2.1. Особенности продукции активных форм кислорода мононуклеарными лейкоцитами крови у больных острыми воспалительными заболеваниями 76
3.2.2. Изменения количества апоптотически измененных мононуклеарных лейкоцитов крови у больных острыми воспалительными заболеваниями 77
3.2.3. Изменения количества клеток со сниженным митохондриальным трансмембранным потенциалом в культуре мононуклеарных лейкоцитов крови у больных острыми воспалительными заболеваниями 78
3.2.4. Состояние TNFa-индуцированного апоптоза мононуклеарных лейкоцитов крови у больных острыми воспалительными заболеваниями 79
3.3. Молекулярные механизмы реализации программированной гибели мононуклеарных лейкоцитов крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении 81
3.3.1. Уровень факторов транскрипции Р53 и NF-kB в мононуклеарных лейкоцитах крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении 82
3.3.2. Содержание белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2 в мононуклеарных лейкоцитах крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении 83
3.3.3. Уровень экспрессии мРНК генов белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2 в мононуклеарных лейкоцитах крови при окислительном стрессе in vitro и остром воспалении 85
Глава 4. Обсуждение результатов исследования 88
Выводы 115
Список литературы 116
