ВВЕДЕНИЕ ............................................................................................................................................. 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ..................................................................................................... 13
1.1 Молекулярные аспекты патогенеза рака молочной железы ...................................................... 13
1.1.1 Молекулярная классификация рака молочной железы ........................................................... 13
1.1.2 Нарушения сигнальных путей в клетках РМЖ ........................................................................ 16
1.2. Молекулярные механизмы метастазирования РМЖ ................................................................. 18
1.3. Роль активации аутофагии в развитии химиорезистентности РМЖ ....................................... 21
1.4. Современные подходы к терапии рака молочной железы ........................................................ 23
1.5. Глюкокортикоиды: механизмы действия и применение в комбинированной химиотерапии
РМЖ....................................................................................................................................................... 25
1.5.1. Механизмы действия рецептора глюкокортикоидов .............................................................. 26
1.5.2. Участие рецептора глюкокортикоидов в регуляции сигнальных путей в клетках ............. 30
1.5.3. Специфика реализации механизма действия глюкокортикоидов в терапии рака молочной
железы ................................................................................................................................................... 33
1.5.4. Побочные эффекты глюкокортикоидов ................................................................................... 33
1.5.5. Влияние глюкокортикоидов на прогрессию РМЖ ................................................................. 34
1.5.6. Способы снижения побочных эффектов и повышения терапевтического действия
глюкокортикоидов ............................................................................................................................... 36
1.6. Селективные модуляторы рецептора глюкокортикоидов ......................................................... 37
1.6.1. Compound А и его синтетические аналоги .............................................................................. 41
1.7 Заключение к обзору литературы ................................................................................................. 45
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ............................................................................................. 47
2.1. Приборы и реактивы ..................................................................................................................... 47
2.2. Радиолигандный анализ конкурентного связывания ................................................................. 48
2.3. Оценка пролиферативной активности ........................................................................................ 49
2.4. Получение трансформированных клеток ................................................................................... 49
2.4.1. Трансформация компетентных клеток и выделение плазмидной ДНК ................................ 49
2.4.2. Получение вируса и инфекция клеток ..................................................................................... 50
2.5. Анализ клеточного цикла методом проточной цитофлуориметрии ........................................ 50
2.6. Выделение белка и вестерн-блоттинг ......................................................................................... 51
2.7. Выделение РНК и обратная транскрипция ................................................................................. 53
2.8. Количественная полимеразная цепная реакция ......................................................................... 53
2.8.1 Оценка экспрессии генов - регуляторов миграции и метастазирования ............................... 53
2.8.2. Оценка экспрессии GR-зависимых генов ................................................................................ 54
2.9. Люциферазный репортерный анализ .......................................................................................... 57
2.10. Исследование миграционной активности .............................................................................. 57
2.10.1. Миграция клеток через поры камеры Бойдена ..................................................................... 57
2.10.2. Тест на зарастание раны .......................................................................................................... 58
2.11 Ядерно-магнитный резонанс ....................................................................................................... 58
2.12 Анализ целостности щелевых контактов ................................................................................... 58
2.13 Молекулярный докинг ................................................................................................................. 59
2.14. Статистическая обработка данных ............................................................................................ 59
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ .................................................................................................................... 60
3.1 Оценка аффинности CpdA-03 к GR .............................................................................................. 60
3.2 Оценка стабильности молекулы CpdA-03 ................................................................................... 62
3.3 Антипролиферативные эффекты SEGRA .................................................................................... 65
3.4 Оценка трансактивационного и трансрепрессорного потенциала CpdA и CpdA-03 в клетках РМЖ....................................................................................................................................................... 70
3.4.1 Исследование влияния CpdA и CpdA-03 на транслокацию GR в ядро клеток РМЖ ........... 70
3.4.2 Оценка влияния CpdA и CpdA-03 на уровень фосфорилирования GR в клетках РМЖ ...... 71
3.4.3 Анализ изменения экспрессии GR-зависимых генов .............................................................. 73
3.4.4 Анализ трансрепрессорного потенциала SEGRA и GC в клетках РМЖ ............................... 77
3.5 Оценка действия SEGRA и GC на миграционную способность клеток РМЖ ........................ 79
3.5.1 Тест на зарастание раны ............................................................................................................. 79
3.5.2. Миграция в камерах Бойдена .................................................................................................... 80
3.5.2 Интегральный анализ влияния лигандов GR на щелевые контакты ...................................... 82
3.5.3 Анализ действия лигандов GR на экспрессию генов и белков – регуляторов межклеточной адгезии ................................................................................................................................................... 84
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ..................................................................................... 88
ЗАКЛЮЧЕНИЕ .................................................................................................................................... 96
ВЫВОДЫ .............................................................................................................................................. 98
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ....................................................... 99
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ .................................................................................................................. 101
