Введение
Глава 1 Обзор литературы 12
1.1 Растительно–микробные взаимоотношения в ризосфере и современные представления о систематике и физиологии ассоциативных бактерий рода Azospirillum 12
1.2 Общая характеристика фенолоксидаз 21
1.3 Фенолоксидазная активность бактерии рода Azospirillum 29
1.4 Биологический синтез золотых наночастиц микроорганизмами 32
Глава 2 Объекты, материалы и методы исследования
2.1 Микроорганизмы и условия их культивирования 35
2.2 Материалы и методы исследования 2.2.1 Определение активности внеклеточной Mn–пероксидазы 35
2.2.2 Оценка активности Mn–пероксидазы при выращивании бактерий на среде содержащей соединения ароматической природы 36
2.2.3 Определение концентрации белка 36
2.2.4 Определение активности Mn–пероксидазы при инокуляции корней проростков пшеницы азоспириллами
2.2.4.1 Инокуляция проростков пшеницы бактериями 37
2.2.4.2 Качественное обнаружение Mn–пероксидазной активности на корнях
2.2.5 Выделение и очистка фермента 38
2.2.6 Электрофоретический анализ ферментов 39
2.2.7 Степень чистоты полученных препаратов 39
2.2.8 Определение pH–оптимумов выделенных ферментов 39
2.2.9 Установление температурного оптимума 40
2.2.10 Определение времени полуинактивации ферментов 40
2.2.11 Ингибирование этилендиаминтетраацетатом 40 2.2.12 Субстратная специфичность 40
2.2.13 Определение лигнинолитической активности азоспирилл 41
2.2.14 Определение лигниндеградирующей функции Mn–пероксидазы 41
2.2.15 Установление чувствительности азоспирилл к присутствию в среде золотохлористоводородной кислоты 42
2.2.16 Методы обнаружения и изучения частиц восстановленного золота 2.2.16.1 Просвечивающая электронная микроскопия 43
2.2.16.2 Ультрафиолетовая спектроскопия 43
2.2.16.3 Рентгеновская флуоресценция 44
2.2.16.4 Динамическое светорассеяние (фотонная корреляционная спектроскопия) 44
2.2.17 Статистическая обработка результатов 44
Глава 3 Результаты и их обсуждение 45
3.1 Обнаружение активности внеклеточной Mn–пероксидазы 45
3.2 Зависимость продукции Mn–пероксидазы A. brasilense Sp245 и Sp7 от условий культивирования 46
3.3 Влияние фенольных соединений на Mn–пероксидазную активность 49
3.4 Активность Mn–пероксидазы A. brasilense при инокуляции корней пшеницы 53
3.5 Выделение и очистка Mn–пероксидазы A. brasilense 55
3.6 Характеристика полученных препаратов MnПSp245 и MnПSp7 65
3.7 Лигнинолитическая активность A. brasilense Sp245 и Sp7 и участие Mn–пероксидазы в процессах окисления модельных соединений лигнина 68
3.8 Восстановление золота из хлораурата бактериями Azospirillum brasilense и возможная роль Mn-пероксидазы в данном процессе 77
3.8.1 Влияние золотосодержащего соединения HAuCl4 на рост азоспирилл 77
3.8.2 Биосинтез золотых наночастиц бактериями A. brasilense 78
3.8.3 Образование золотых наночастиц в присутствии препаратов Mn–пероксидаз A. brasilense Sp245 и Sp7 83
3.8.4 Предполагаемый механизм биовосстановления золота Mn–пероксидазами A. brasilense 86
Заключение 91
Выводы 94
Список сокращений и условных обозначений 96
Список использованной литературы
