Введение
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 13
1.1. Стволовые клетки человека 13
1.2. Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки жировой ткани 19
1.2.1. Жировая ткань 19
1.2.2. Фенотипическая характеристика ММСК жировой ткани, CD - маркерный профиль 22
1.2.3. Потенциал дифференцировки ММСК жировой ткани 25
1. Адипогенез 25
2. Остеогенез 28
3. Хондрогенез 35
1.3. Иммуномодуляторный эффект ММСК жировой ткани 42
1.4. Перспективы применения ММСК жировой ткани 46
1.5. Заключение 55
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 57
2.1. Материалы и методы 57
2.1.1. Оборудование 57
2.1.2. Реактивы и расходные материалы 58
2.1.3. Метод получения ММСК жировой ткани 59
2.1.4. Морфологический анализ 60
1. Микроскопия 60
2. Анализ митотического индекса 60
3. Время цитогенерации 61
4. Оценка жизнеспособности 61
2.1. 5. Иммунофенотипирование 61
2.1.6. Кариотипирование 62
2.1.7. Анализ клеточного цикла 63
2.1.8. Дифференцировка ММСК жировой ткани 64
1. Адипогенная дифференцировка 64
2. Остеогенная дифференцировка 64
3. Хондрогенная дифференцировка 64
2.1.9. Молекулярный анализ полученных двухмерных структур, при на правленной остео- и хондродифференцировке 65
2.1.10. Иммуноцитохимия и иммуногистохимия 67
1. Иммуноцитохимия с использованием Novostain Universal Detection Kit (DAB-kit) 67
2. Иммуногистохимия 68
3. Специфическая окраска клеток 68
2.1.11. Доклинические испытания с применением ММСК ЖТ 69
2.1.12. Молекулярный анализ локализации ММСК ЖТ в организме экспериментальных животных (по Y-хромосоме) 70
2.1.13. Метод получения трехмерных трансплантатов хрящевой ткани...70
2.1.14. Доклинические испытания - трансплантация ТТХТ на основе ММСК жировой ткани в организм иммунодефицитных мышей 71
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 72
2.2.1 Метод выделения ММСК из жировой ткани 72
2.2.2. Морфология и кариотип ММСК жировой ткани 73
2.2.3. Анализ клеточного цикла 76
2.2.4. Иммунофенотипирование ММСК жировой ткани 81
2.2.5. Дифференцировка ММСК жировой ткани 88
2.2.6. Молекулярный анализ полученных двухмерных структур, при направленной остео- и хондродифференцировке 96
2.2.7. Доклинические исследования физиологического распределения и локализации ММСК ЖТ в организме мышей 98
2.2.8. Создание трехмерных трансплантатов хрящевой ткани (ТТХТ) 99
2.2.9. Гистологический и иммуногистохимический анализ ТТХТ, полученных на основе коллагена и полимолочной кислоты 102
2.2.10. Доклинические испытания - трансплантация ТТХТ на основе ММСК жировой ткани в организм иммунодефицитных мышей Balb/C nude 106
2.2.11. Иммуногистохимический анализ полученных ТТХТ после in vivo теста 108
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 111
4. ВЫВОДЫ 129
5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 131
6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ
ВЫВОДОВ 132
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 133
ПРИЛОЖЕНИЕ 165
