Введение
I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
ГЛАВА 1. ЦЕЛЛЮЛОЗА И ЦЕЛЛЮЛОЗОСОДЕРЖАЩИЕ МАТЕРИАЛЫ (ЦСМ)..9
1.1. Виды и запасы ЦСМ 9
1.2. Состав и структура ЦСМ 10
1.3. Предобработка ЦСМ 15
ГЛАВА 2. ФЕРМЕНТАТИВНАЯ ДЕГРАДАЦИЯ УПОРЯДОЧЕННЫХ ФОРМ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ 17
2.1. Современные представления о классификации ферментов 17
2.2. Целлюлолитические ферменты 21
2.3. Механизм действия целлюлазного комплекса 26
2.4. Факторы, влияющие на эффективность ферментативного гидролиза целлюлозы 29
ГЛАВА 3. ПЕРСПЕКТИВНЫЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ
КОНВЕРСИИ ЦСМ 33
ГЛАВА 4. ШТАММ PENICILLIUM VERRUCULOSUMH КОМПОНЕНТЫ СЕКРЕТИРУЕМОГО ИМ ФЕРМЕНТНОГО КОМПЛЕКСА 40
4.1. Характеристика штамма P.verruculosum 40
4.2. Ферменты P.verruculosum 42
II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 5. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ 44
5.1. Использованные ферменты 44
5.2. Субстраты и реактивы 45
5.3. Методы определения Сахаров и концентрации белка 47
5.4. Методы выделения и очистки ферментов 47
5.5. Методы определения активности ферментов 48
5.6. Масс-спектрометрический анализ пептидов и белков 49
5.7. Определение рН- и температурного оптимумов действия ферментов 50
5.8. Исследование устойчивости ферментов к "термошоку" 50
5.9. Определение адсорбционных характеристик ферментов 51
5.10. Гель-хроматографический анализ продуктов ферментативного гидролиза высокомолекулярных субстратов 51
5.11. Оценка способности целлюлаз к биодепигментации джинсовой ткани 51
5.12. Оценка способности ферментов к биополировке окрашенной хлопковой ткани 55
5.13. Исследование кинетики глубокого гидролиза МКЦ 55
5.14. Определение гидролитической способности ферментных препаратов 56
III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 6. КОМПОНЕНТНЫЙ СОСТАВ КОМПЛЕКСА P. VERRUCULOSUM. 57
6.1. Целлюлолитические и сопутствующие активности целлюлазного комплекса P.verruculosum 57
6.2. Фракционирование исходного ферментного препарата с помощью ионобменной хроматографии на Source 15 Q 61
6.2.1. Разделение фракции №6 после АОХ на Source 15 Q 71
6.2.2. Разделение фракции №7 после АОХ на Source 15 Q 73
6.2.3. Разделение несвязавшейся фракции после АОХ на Source 15 Q 76
6.3. Идентификация выделенных ферментов методом масс-спектрометрии 83
ГЛАВА 7. СВОЙСТВА ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ КОМПЛЕКСА P.VERRUCULOSUM. 95
7.1. Субстратная специфичность 95
7.2. рН- и температурные оптимумы действия ферментов, стабильность, устойчивость к термошоку 103
7.3. Адсорбционная способность выделенных ферментов 111
7.4. Анализ способности ферментов к увеличению питательной ценности кормов животных и птиц 113
7.5. Выявление ключевых тополитических ферментов 119
7.6. Выявление ключевых гидролитических ферментов 121
ГЛАВА 8. СРАВНЕНИЕ КОМПОНЕНТНОГО СОСТАВА ФЕРМЕНТНЫХ КОМЛЕКСОВ НА ОСНОВЕ МУТАНТНЫХ ШТАММОВ P. VERRUCULOSUM.....123
8.1. Результаты анионобменной хроматографии на Mono Q 124
8.2. Результаты гидрофобной хроматографии на Source Isopropyl 130
ГЛАВА 9. СРАВНЕНИЕ ГИДРОЛИТИЧЕСКОЙ СПОСОБНОСТИ ЦЕЛЛЮЛАЗНЫХ КОМПЛЕКСОВ P. VERRUCULOSUMYL TRICHODERMA SP 138
9.1. Сравнение осахаривающей способности целлюлазных препаратов 138
9.2. Вклад слабо и сильно адсорбирующихся компонентов целлюлазного комплекса в гидролиз целлюлозы 144
9.3. Анализ зависимости выхода Сахаров от активности в реакционной смеси...148
9.4. Влияние р-глюкозидазы на эффективность ферментативного гидролиза
целлюлозы 153
ВЫВОДЫ 158
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 160
ПРИЛОЖЕНИЯ (масс-спектры трипсиновых гидролизатов вьщеленных ферментов).
