Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1 1 Состояние «некультивируемости» -стратегия выживания бактериальных клеток в неблагоприятных (стрессовых) условиях? 7
1.1.1 Явление "некультивируемости" в бактериальных популяциях , 7
1.1.2 Критерии состояния "некультивируемости" 9
1 1 3 Образование "некультивируємых" форм бактерий в различных условиях 12
1 2 Реактивация («оживление») нкформ бактерий 21
1 3 «социальное» поведение бактериальных популяций и состояние «некультивируемости» 27
1 4 Латентность туберкулезной инфекции 29
1 4 1 Получение латентных форм Mycobacterium tuberculosis на экспериментальных животных 30
1 4 2 Модели получения покоящихся («некультивируемых») форм Mycobacterium tuberculosis tn vitro 33
1 5 Биохимические изменения в клетках микобактерий при моделировании латентного туберкулеза 37
1 6 Генетическая регуляция ми ко бактериальной персистенции 40
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 48
2 Выращивание бактериальных культур . 48
2 2 Подсчет общего числа клеток .. 49
2 3 Микроскопические исследования . 49
2 4 Оценка культивируемости клеток 50
2 5 Реактивация «некультивируемых» клеток 50
2 6 Приготовление клеточных экстрактов 51
2 7 Выделение мембран . 51
2 8 Определение концентрации белка . 51
2 9 Определение активностей внутриклеточных ферментов 52
2.10 Определениеоксидазныхидегидрогеназныхактивн0стей ... ,52
211 Определение плавучей плотности клеток . 53
2 12 Выделение и очистка рнк .. 53
2 13 Обратная пцр 54
2 14 Транскриптомный анализ , 55
2 15 Получение рекомбинантных белков rpf . 55
2 16 Определение мурамидазной активности белков rpf и его модификаций 56
2 17 Электрофорез белков rpf в пааг 57
2 18 Иммуноблоттингбелковкр^ 57
2 19 твердофазный иммунофермектный анализ 58
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 59
3 Получение нк форм бактерий р mycobacterium 59
3 2 Характеристика нк форм м smegmatis активности ферментов и исследование уровня транскрипции генов при переходе клеток в состояние «некультивируемости» . .70
3 Роль белков семейства rpf в процессах перехода клеток микобактерий в нк состояние и последующей реактивации 95
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 110
Выводы 126
Список цитируемой литературы 127
