Введение
3 Обзор литературных данных 11
3.1 Никотиновые и родственные рецепторы нейромедиаторов. Семейство Cys-петельных рецепторов 11
3.2 Строение Cys-петельных рецепторов 16
3.2.1 Внеклеточный домен 16
3.2.2 Трансмембранный домен 16
3.2.3 Химерные белки 17
3.2.4 Внутриклеточный домен 17
3.2.5 Лиганд-связывающие участки 19
3.2.5.1 Ортостерический лиганд-связывающий участок 19
3.2.5.2 Канальные связывающие центры 21
3.2.5.3 Аллостерические участки связывания лигандов 22
3.3 Функционирование нАХР 24
3.4 Мышечный нАХР 29
3.4.1 Связь мышечного нАХР с заболеваниями 30
3.4.1.1 Миастения гравис 30
3.4.1.2 Врожденные миастенические синдромы 31
3.5 Нейрональные нАХР 32
3.5.1 Связь нейрональных нАХР с заболеваниями 36
3.5.1.1 Нейродегенеративные заболевания 36
3.5.1.1.1 Болезнь Альцгеймера 37
3.5.1.2 Шизофрения 40
3.5.1.3 Аутизм 41
3.5.1.4 Хроническая боль 42
3.6 нАХР «не-нейронального» происхождения 45
3.6.1 Холинергический противовоспалительный рефлекс 46
3.6.1.1 Роль 7 нАХР моноцитов/макрофагов 47
3.6.1.2 Роль 7 нАХР микроглии и астроцитов 47
3.6.1.3 Сигнальные каскады, запускаемые активацией 7 нАХР 48
3.7 Лиганды нАХР 48
3.7.1 Агонисты нАХР 50
3.7.1.1 Полные агонисты нАХР 55
3.7.1.2 Частичные агонисты нАХР 55
3.7.2 Антагонисты нАХР 57
3.7.2.1 Конкурентные антагонисты нАХР 57
3.7.2.1.1 -Нейротоксины змей 57
3.7.2.1.2 -Конотоксины 59
3.7.2.1.3 Низкомолекулярные конкурентные антагонисты нАХР 60
3.7.2.2 Неконкурентные антагонисты нАХР 62
3.7.3 Позитивные аллостерические модуляторы (ПАМ) нАХР 63
4 Материалы и методы 68
4.1 Материалы 68
4.2 Методы 70
4.2.1 Работа с животными 70
4.2.2 Молекулярно-биологические методы 78
4.2.3 Клеточные работы 82
4.2.4 Цито- и гистохимия 91
4.2.5 Кальциевый имиджинг 98
4.2.6 Электрофизиология 101
4.2.7 Радиолигандный анализ 105
4.2.8 In silico методы 106
5 Результаты и обсуждение 108
5.1 Разработка методов цито- и гистохимической детекции и анализа аффинности и специфичности к лигандам Cys-петельных рецепторов с использованием природных пептидно-белковых нейротоксинов, а также их флуоресцентных и биотинилированных аналогов. 108
5.2 Различия в специфичности, аффинности и механизме связывания трехпетельных -нейротоксинов с разными Cys-петельными рецепторами и их моделями 112
5.3 Определение селективности, аффинности и механизма ингибирования нАХР синтетическим трехпетельным белком SLURP-1 человека. Подход кальциевого имиджинга 117
5.4 Функциональная активность нАХР в организме. Ноцицепция 131
5.4.1 Подтипы ацетилхолиновых рецепторов в мозговых оболочках 131
5.4.2 Эндогенная холинергическая система мозговых оболочек 132
5.4.3 Клеточные мишени действия эндогенного АХ. Сенсорные нейроны тройничного ганглия. 134
5.4.4 Клеточные мишени действия эндогенного АХ. Сенсорные нейроны спинномозгового ганглия 137
5.4.5 Нейрохимический профиль сенсорных нейронов, экспрессирующих 7 нАХР 140
5.4.6 Аксональная локализация и транспорт 7 нАХР в сенсорных нейронах 141
5.4.7 Выброс CGRP сенсорными нейронами 143
5.4.8 Клеточные мишени действия эндогенного АХ. Тучные клетки 145
5.4.9 Роль холинергической нервной передачи при ноцицепции в оболочках головного мозга 147
5.5 Функциональная активность нАХР в организме. Воспаление 149
5.6 Нейропластичность. Норма и патология 154
5.6.1 Нейрогенез 154
5.6.2 Ранние стадии болезни Паркинсона 161
5.7 Низкомолекулярные соединения 167
5.7.1 6-бромогипафорин 168
5.7.2 Производные хинолина 170
5.7.3 Алкалоиды из яда кураре племени Matis 173
5.8 Доклинические исследования эффективности и безопасности лекарственного средства на основе синтетического пептида аземиопсина в качестве миорелаксанта 179
5.8.1 Специфическая активность Az in vitro 180
5.8.2 Специфическая миорелаксантная активность Az 182
5.8.3 Фармакокинетика Az 184
5.8.4 Острая токсичность Az 186
5.8.5 Субхроническая токсичность Az 187
5.8.6 Иммунотоксичность Az 188
5.8.7 Аллергенность Az 191
5.8.8 Мутагенность Az 192
5.8.9 Доклинический профиль Az 193
6 Заключение 195
7 Выводы 203
8 Благодарности 205
9 Список литературы 208
