Введение
1. Обзор литературы
1.1. ДНК-идентификация личности
1.1.1. Идентификация личности 11
1.1.2. ДНК-идентификация личности на основе вариабельного числа тандемных повторов VNTR-локусов 14
1.1.3. ДНК-идентификация личности на основе коротких тандемных повторов STR-локусов 18
1.1.4. ДНК-идентификация личности на основе однонуклеотидного полиморфизма ДНК 25
1.2. Методы обнаружения однонуклеотидных замен 29
1.2.1. Однонуклеотидное удлинение праймера 32
1.2.2. Аллель-специфичная ПНР 36
1.2.3. Анализ снипов путем определения температур плавления дуплексов 39
1.2.4. Инвазивное расщепление 41
1.2.5. Методы анализа снипов, основанные на лигировании 43
1.2.6. Аллель-специфичная гибридизация 45
1.2.7. Анализ однонуклеотидных замен с помощью ДНК-чипов 48
1.2.8. Изготовление ДНК-чипов 49
2. Объекты и методы исследований
2.1. Краткая характеристика объектов исследований 52
2.2. Выделение геномной ДНК человека 54
2.3. Синтез и очистка олигодезоксирибонуклеотидов 54
2.4. Фосфорилирование олигонуклеотидов 55
2.5. Полимеразная цепная реакция - ПНР 56
2.6. Полимеразная цепная реакция в реальном времени - ПЦР- РВ 56
2.7. Лигазная цепная реакция в реальном времени - ЛЦР-РВ 57
2.8. Аналитический гель-электрофорез ДНК 57
2.9. Технология циклирующей пробы - ТЦП 58
2.10. Иммобилизация олигонуклеотидов на стекло 59
2.11. Объединение циклической амплификации по типу катящегося кольца и технологии циклирующей пробы 60
2.12. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей 62
2.13. Реактивы и материалы 62
2.14. Составы использованных стандартных растворов 63
3. Результаты и обсуждение
3.1. Принципы генетического штрих-кодирования 64
3.2. Методы детекции однонуклеотидных замен
3.2.1. Лигазная цепная реакция в режиме реального времени 78
3.2.2. Технология циклирующей пробы 87
3.2.3. ТЦП в чиповом варианте 95
3.2.4. Объединение циклической амплификации по типу катящегося кольца и технологии циклирующей пробы с рибобиконом 97
3.3. Базы данных по генетическим штрих-кодам населения и их программное сопровождение 104
Заключение 115
