Введение
1. Хроматофокусирование на анионообменных и катионообменных колонках. 13
1.1. Принципы разделения цвиттер-ионных макромолекул методом ХФ 15
1.2. Разделение переходных металлов методом ХФ 17
1.3. Ионообменные сорбенты для хроматофокусирования 19
1.3.1. Матрица 21
1.3.2. Функциональные группы 23
1.4. Катионообменные сорбенты 27
1.4.1. Разделение белков 28
1.4.2. Разделение пептидов 32
1.5. Подвижные буферные фазы в градиентном элюировании 35
1.5.1. Стартовые (уравновешивающие) растворы 35
1.5.2. Элюенты, используемые в хроматофокусировании 37
1.5.2.1. Полибуферные элюенты (полиамфолиты, полибуферы) 38
1.5.2.2. Многокомпонентные буферные смеси 40
2. Изучение особенностей формирования градиентов PH 43
2.1. Моделирование градиентов рН. 43
2.1.1. Модель Слайтермана 43
2.1.2. Модель Мурела 44
2.1.3. Модель Фрея 44
2.1.4. Модель Тессмана 45
2.2. Изучение процессов формирования градиентов рН 46
2.2.1. Влияние ионной силы 46
2.2.2. «Аномальный» подъем 50
2.2.3. Совместное влияние ионной силы и слабого основания в подвижных фазах 54
2.2.4. Примеры разделения 56
3. Индуцированные градиенты ph 58
4. Аппаратура, реагенты, методики экспериментов. 61
4.1. Аппаратура 61
4.2. Сорбенты, реагенты, растворы. 62
4.3. Методики экспериментов 64
5. Свойства карбоксильных сорбентов. 67
5.1. Выбор сорбента для ХФ металлов 67
5.2. Кислотно-основные свойства карбоксильных сорбентов 68
5.3. Комплексообразующие свойства СМ-52 69
5.4. Сравнение свойств карбоксильных сорбентов 73
5.4.1. Кинетика сорбции 73
5.4.2. Комплексообразующие свойства карбоксильных сорбентов 74
5.4.3. Сорбционная емкость 75
5.4.4. Селективность сорбции 78
5.4.5. Извлечение ионов Си2+ в зависимости от рН 78
6. Нисходящие градиенты рн в хроматофокусировании 81
6.1. Выбор подвижных фаз 81
6.1.1. Полиамфолитные элюенты 82
6.1.2. Влияние природы стартового раствора 85
6.1.3. Простые элюенты 86
6.2. Влияние ионной силы элюента 92
6.3. Разделение переходных металлов 95
6.4. Градиент ионной силы 97
7. Индуцированные нисходящие градиенты РН. 101
7.1. Выбор подвижных фаз 102
7.1.1. Влияние концентрации ИР 103
7.1.2. Влияние концентрации элюента 105
7.1.3. Влияние слабого основания в составе элюента 106
7.1.4. Влияние природы элюента 108
7.1.5. Влияние ионной силы подвижных фаз 109
7.1.6. Влияние природы электролита в составе элюента 111
7.1.7. Ацетатная система 112
7.2. Разделение ионов металлов 114
8. Восходящие градиенты рн в хроматофокусировании 118
8.1. Выбор подвижных фаз 118
8.1.1. Влияние природы и концентрации стартового раствора 120
8.1.2. Влияние природы элюента 121
8.1.3. Влияние слабого основания в составе стартового раствора 122
8.2. Влияние ионной силы элюента 123
8.3. Разделение модельной смеси белков. 127
8.4. Влияние ионной силы стартового раствора 128
8.5. Восходящие градиенты рН на сорбенте для ВЭЖХ 129
8.5.1. Влияние ионной силы подвижных фаз 129
8.5.2. Разделение изоформ ферментов 132
8.6. Восходящие градиенты рН на сильных катионообменниках 133
8.6.1. Влияние ионной силы элюента 133
8.6.2. Разделение пептидов 134
8.6.2.1. Выбор подвижных фаз 134
8.6.2.2. Влияние ионной силы стартового раствора 135
8.6.2.3. Влияние добавок ацетонитрила 137
8.6.2.4. Влияние ионной силы элюента 139
8.6.2.5. Одновременное влияние ионной силы и добавок ацетонитрила 142
Выводы 144
