Введение
I. Обзор литературы 10
1.1. Современные аспекты маркерной селекции 10
1.2. Современные представления о метаболизме липидов 13
1.3. Роль гормона лептина в формировании фенотипа жирового обмена 23
1.4. Структурная и функциональная характеристика гена оЪ 29
1.5. Мутации и полиморфизмы в гене лептина и их ассоциации с патологическими фенотипами 40
II. Материалы и методы исследования 46
2.1. Методика забора крови 46
2.2. Выделение ДНК 46
2.3. ПЦР-ПДРФ анализ 48
2.4. Проведение полимеразно-цепной реакции (ПЦР) 48
2.5. Проведение рестрикции 51
2.6. Проведение электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) 51
2.7. Окраска геля 52
2.8. Обработка результатов анализа электрофореза 52
2.9. Методика выделения липидов методом Блайя-Дайера 53
2.10. Фракционирование липидов в тонких слоях силикагеля и их количественное определение 53
2.11. Определение содержания диеновых и триеновых коньюгатов в липидах плазмы крови 55
2.12. ТБК-тест для измерения концентрации вторичных продуктов перекисного окисления липидов 55
2.13. Молекулярное моделирование взаимодействия липидов с ДНК 56
2.14. Секвенирование регуляторной области гена оЪ 57
2.15. Оценка фенотипа 57
2.16. Статистическая обработка 58
III. Результаты собственных исследований 59
3.1. Изучение структурно-функциональной организации гена оЪ 60
3.2. Проведение филогенетического анализа гена оЪ 66
3.3. Изучение мутационной изменчивости гена оЪ 72
3.4. Изучение патогенетического значения мутации С3469Т у свиней 81
3.5. Моделирование методом молекулярной механики взаимодействий ДНК-липид с промотором гена оЪ свиньи 85
Обсуждение результатов собственных исследований 90
Выводы 97
Практические рекомендации 99
Список использованных источников
