Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Характеристика исследуемых ферментов 10
1.1.1. Пепсин 11
1.1.2. Трипсин 24
1.1.3. Химотрипсин 32
1.1.4. Коллагеназа "! 39
1.1.5. Эластаза.. 44
1.1.6. Лейцинаминопептидаза 49
2. Экспериментальная часть 54
2.1. Материал и реактивы
2.2. Методы очистки ферментов
2.2.1. Определение количества ферментов 55
2.2.2. Приготовление ацетоновых порошков 55
2.2.3. Высаливание, диализ, концентрирование растворов 56
2.2.4. Гель-хроматография, обессоливание препаратов 57
2.2.5. Ионообменная хроматография 58
2.2.6. Изоэлекторфокусирование, определение изоточек ферментов 59
2.3. Биохимические методы исследования 61
2.3.1. Определение активности пепсина 61
2.3.2. Определение активности трипсина 62
2.3.3. Определение активности химотрипсина 64
2.3.4. Определение активности коллагеназы 65
2.3.5. Определение активности эластазы 66
2.3.6. Определение активности лейцинаминопептидазы 66
2.3.7. Определение концентрации белка 67
2.4. Методы изучения физико-химических свойств
ферментов 67
2.4.1. Область рН-стабильности 67
2.4.2. Область рН-активности .68
2.4.3. Термостабильность, температурный оптимум действия.. 68
2.4.4. Определение молекулярной массы ферментов 69
2.4.5. Действие ионов металлов, активаторов и ингибиторов 70
2.5-; Статистическая обработка результатов .71
3. Результаты исследований и их обсуждение 72
3.1. Определение количества ферментов и их распределение в желудочнсг-кижечном тракте озерной лягушки. 72
3.2. Выделение и очистка протеолитических фрментов озерной лягушки 75
3.2.1. Влияние обработки ацетоном на активность пищеварительных ферментов 75
3.2.2. Высаливание ферментов сульфатом аммония
3.2.1. Разделение ферментов пищевода гель-хроматографией на сефадексах 79
3.2.2. Разделение ферментов пищевода ионообменной хроматографией 83
3.2.3. Разделение ферментов пищевода изоэлекторофоку-сированием на колонке в градиенте плотности сахарозы 84
3.2.4. Разделение ферментов желудка гель-хроматографией на сефадексах 88
3.2.5. Разделение ферментов желудка ионообменной хроматографией
3.2.6. Разделение ферментов желудка изоэлекторофоку-сированием на колонке в градиенте плотности сахарозы 92
3.2.7. Разделение ферментов поджелудочной железы гель-хроматографией на сефадексах — 97
3.2:8; Разделение ферментов поджелудочной железы ионообменной хроматографией 99
3.2.9. Разделение ферментов поджелудочной железы изоэлекторофокусярованием на колонке в градиенте плотности сахарозы 102
3.3. Выделение ферментов языка озерной лягушки 107
3.3.1. Разделение ферментов языка изоэлекторофоку сированием на колонке в градиенте плотности сахарозы 109
3.4. Гистологические исследования пищевода и желудка озерной лягушки ПО
3.5. Свойства протеолитических ферментов озерной лягушки 114
3.5.1. Пепсин 114
3.5.2. Трипсин 125
3.5.3. Химотрипсин 136
3.5.4. Эластазаи коллагеназа 141
3.5.5. Лейцинаминопептидаза 149
3.5.6. Протеиназы языка 153
3.5.7. Ферменты кишечника головастиков 157
Заключение 160
Выводы 164
Список литературы
