Введение
ГЛАВА 1. Литературный обзор 13
1.1. Роль химио- и таргетной терапии в лечении опухолей мозга 13
1.2. Гематоэнцефалический барьер
1.2.1. Особенности строения и транспортных механизмов ГЭБ 18
1.2.2. Способы доставки лекарственных средств в мозг 21
1.2.3. Методы оценки способности веществ преодолевать ГЭБ 25
1.3. Опухолевый супрессор р53 34
1.3.1. Строение и функции р53 34
1.3.2. Регуляция активности р53 35
1.3.3. Ингибиторы MDM2 37
1.4. Заключение 44
ГЛАВА 2. Обсуждение результатов 45
2.1. Выбор объектов исследования 45
2.2. In silico изучение влияния мембранотропных заместителей на целевую активность и способность веществ преодолевать ГЭБ 47
2.3. Синтез соединений 53
2.4. Разработка in vitro метода для сравнительного анализа способности веществ преодолевать мембраны эндотелиоцитов ГЭБ 57
2.5. Способность 2,3-замещенных 3-гидроксиизоиндолинонов преодолевать мембраны 64
2.6. Валидация метода оценки способности изоиндолинонов провоцировать р53-опосредованный апоптоз раковых клеток 66 2.7. Cпособность изоиндолинонов провоцировать р53-опосредованный апоптоз 67
2.8. Выделение и целевая активность диастереомеров 2,3-замещенных
3-гидроксиизоиндолинонов 71
2.9. Целевая активность диастереомеров 2,3-замещенных 3 гидроксиизоиндолинонов 78
2.10. Модификация производного 3-иминоиндолинона 80
ГЛАВА 3. Экспериментальная часть 85
3.1. Выбор объектов исследования 85
3.2. Расчетные методы
3.2.1. Липофильность и растворимость веществ 85
3.2.2. Способность веществ преодолевать ГЭБ 86
3.2.3. Способность веществ взаимодействовать с р53-связывающей полостью MDM2 86
3.2.4. Квантово-химические расчеты ЯМР спектров 87
3.3. Синтез производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона 87
3.3.1. Химические реактивы и оборудование 87
3.3.2 Получение простых эфиров 2,3-замещенных 88
3-гидроксиизоиндолин-1-онов 88
3.3.3 Получение сложных эфиров 2,3-замещенных изоиндолин-1-онов 94
3.4. Оценка мембранотропности соединений с использованием искусственных мембран 124
3.4.1. Состав искусственных мембран 124
3.4.2. Метод РАМРА 124
3.4.3. Расчет величин Са и logPe 125
3.5. Оценка биологической активности веществ 126
3.5.1. Использованные клеточные линии 126
3.5.2. Подготовка клеточных культур и исследуемых веществ 126
3.5.3. Клеточный скрининг 127
3.5.4. Влияние исследуемых веществ на уровень белков р53 и MDM2 127
3.5.5. Исследование апоптоза методом проточной цитометрии 128
Заключение 129
Список использованной литературы
