ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………….. 6
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………... 17
1.1. Фиброз печени. Основные аспекты патогенеза………………… 17
1.2. Фукоксантин. Основные характеристики………………………. 23
1.3. Фукоксантин как лекарственное средство……………………… 27
1.4. Терапевтические эффекты фукоксантина при патологии
печени…………………………………………………………………..
30
1.5. Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки.
Биологические свойства………………………………………………
33
1.6. Терапевтические свойства мультипотентных мезенхимальных
стромальных клеток при фиброзе печени……………………………
37
1.7. Проблемы внедрения клеточной терапии на основе
мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в
практическую медицину для лечения фиброза печени……………..
39
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ………………………………………….. 43
2.1. Условия содержания и общая характеристика лабораторных
животных, использованных в экспериментах……………………….
43
2.2. Дизайн экспериментального исследования…………………….. 44
2.3. Выделение мультипотентных мезенхимальных стромальных
клеток из хориона плаценты………………………………………….
47
2.4. Культивирование и субкультивирование мультипотентных
мезенхимальных стромальных клеток……………………………….
49
2.5. Оценка соответствия выделенной клеточной культуры
минимальным критериям Международного общества клеточной и
генной терапии………………………………………………………...
50
2.5.1. Иммунофенотипирование мультипотентных
мезенхимальных стромальных клеток………………………………
51
3
2.5.2. Оценка способности мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток к остеогенной дифференцировке……………..
52
2.5.3. Оценка способности мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток к адипоцитарной дифференцировке…………
54
2.6. Количественная оценка мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, достигших печени, у мышей без фиброза и мышей с CCl4-индуцированным фиброзом………………………….
56
2.7. Лабораторные методы исследования……………………………
58
2.7.1. Гистологические исследования………………………………..
59
2.7.2. Иммуногистохимические исследования………………………
61
2.7.3. Иммуноферментный анализ…………………………………....
65
2.7.4. Биохимические исследования………………………………….
66
2.8. Статистический анализ данных………………………………….
66
Глава 3.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ……………………………………
67
3.1. Идентификация соответствия выделенной культуры мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток критериям Международного общества клеточной и генной терапии и определение их способности к направленной миграции в поврежденную печень………………………………………………
67
3.2. Выраженность морфофункциональных изменений в печени после моделирования фиброза………………………………………..
71
3.2.1. Биохимические показатели сыворотки крови мышей после моделирования фиброза печени………………………………………
71
3.2.2. Фибротические изменения в печени на фоне CCl4-индуцированного повреждения………………………………………
72
3.2.3. Содержание лейкоцитов и цитокинов у мышей после моделирования фиброза печени……………………………………...
77
3.2.4. Заключение……………………………………………………...
79
3.3. Структурно-функциональные изменения в печени при введении фукоксантина на фоне фиброза……………………………
81
4
3.3.1. Биохимические показатели сыворотки крови мышей при введении фукоксантина на фоне фиброза печени…………………...
81
3.3.2. Фибротические изменения в печени лабораторных мышей при введении фукоксантина на фоне фиброза………………………
84
3.3.3. Коллагенолитические ферменты и их ингибиторы в печени мышей при введении фукоксантина на фоне фиброза……………...
91
3.3.4. Содержание лейкоцитов и уровни цитокинов у мышей при введении фукоксантина на фоне фиброза печени…………………...
96
3.3.5. Заключение……………………………………………………...
99
3.4. Морфофункциональные изменения в печени после трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и их комбинированного введения с фукоксантином на фоне фиброза…………………………………………………………………
100
3.4.1. Биохимические показатели сыворотки крови мышей при трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и их комбинированного введения с фукоксантином на фоне фиброза печени……………………………………………………………………………….
100
3.4.2. Фибротические изменения в печени мышей при трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и их комбинированного введения с фукоксантином на фоне фиброза…………………………………………………………………
102
3.4.3. Коллагенолитические ферменты и их ингибиторы в печени мышей при трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и их комбинированного применения с фукоксантином на фоне фиброза……………………………………..
110
3.4.4. Содержание лейкоцитов и уровни цитокинов у мышей при трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и их комбинированного применения с фукоксантином на фоне фиброза печени………………………………………………….115
3.4.5. Заключение……………………………………………………...118
Глава 4.
ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ……………………………………………...
ВЫВОДЫ………………………………………………………………………….125
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ……………………………………………………….126
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………………………128
