Введение
2. Обзор литературы 9
2.1. Роль СЖК как модуляторов проницаемости биологических мембран 9
2.1.1. Разобщающее действие СЖК 9
2.1.2. СЖК как модуляторы перехода проницаемости в митохондриях 11
2.2, Влияние СЖК и Са2+ на состояние и свойства липидного бислоя 20
2.2.1. Фазовое поведение СЖК-липидных смесей 20
2.2.2. Влияние СЖК на проницаемость липидных мембран 21
2.2.3. Катиоп-индуцируемые изменения фазового состояния мембран, содержащих отрицательно-заряженные липиды 25
2.2.4. Изменения проницаемости мембран при фазово-переходных процессах в липидном бислое 28
3. Материалы и методы исследования 30
3.1. Изучение ион-транспортирующих свойств жирных кислот, реконструированных в БЛМ 30
3.2. Приготовление одноламеллярных липосом 31
3.3. Приготовление липосом, загруженных сульфородамином Б 32
3.4. Измерение выхода сульфородамина Б из одноламеллярных липосом 32
3.5. Измерение флуоресценции понил-акридинового оранжевого в липосомальных мембранах 34
3.6. Флуоресцентная корреляционная спектроскопия липосом, меченых N-родамин-диацилфосфатидилэтаноламином 34
3.7. Выделение митохондрий из печени крыс 35
3.8. Экстракция, разделение и количественный анализ липидов из биологических объектов , 36
3.8.1. Экстракция липидов 36
3.8.2. Выделение фракции СЖК и ее количественный анализ 37
3.8.3. Определение содержания фосфора в фосфолипидных образцах 37
3.9. Расчет процентного содержания СЖК в митохопдриальных мембранах 38
4. Результаты и обсуждение 41
4.1. Ионы Са2+ вызывают неспецифическую пермеабилизацию мембран, содержащих насыщенные длишюцепочечные СЖК 41
4.1.1. Опыты на БЛМ 41
4.1.2. Опыты с липосомами 44
4.2. СЖК/Са2+-индуцируемая пермеабилизация мембран происходит в результате образования липидных пор 49
4.3. Механизм СЖК/Са2+-индуцируемого образования липидных пор ... 51
4.3.1. СЖК/Са2+ -индуцируемый выход сульфородамина из липосом не является следствием осмотических эффектов 51
4.3.2. СЖК/Са2+ -индуцируемая пермеабилизация мембраны сопряжена с фазовой сегрегацией комплексов Са2+ с СЖК 53
4.3.3. СЖК/Са2+ -индуцируемое образование липидных пор происходит по механизму хемотропного фазового перехода в липидном би слое 58
4.3.4. Механизм СЖК/Са2+-индуцируемой пермеабилизации мембран имеет «кинетическую» природу 60
4.4. Возможно ли образование липидных пор в митохопдриальнои мембране? 63
4.4.1. Состав митохондриальных липидов благоприятствует СЖК/Са2+-индуцируемому образованию липидных пор 63
4.4.2. СЖК/Са2+ -индуцируемая пермеабилизация митохондриальных и модельных мембран: аналогии и параллели 65
4.4.3. Как может работать механизм СЖК/Са -индуцируемой пермеабилизации митохопдриальнои мембраны 68
4.5. Возможная роль ПК/Са2+-индуцируемого МПП при патологиях 70
5. Заключение 74
5. Выводы 79
6. Приложение 80
7. Список литературы 87
