Введение
Часть 1. Обзор литературы 11
Глава 1. Роль микроорганизмов в круговороте фосфора 11
Глава 2. Поглощение фосфата микроорганизмами 17
Глава 3. Формы и способы резервирования фосфата у микроорганизмов 22
3.1. ПолиР - основной резерв фосфата в клетках микроорганизмов 22
3.2. PPL в качестве фосфорного резерва 30
3.3. Полимерные ортофосфаты металлов (ПОщ) 31
3.4. Минерализация цианобактерий - необычный способ резервирования фосфата 33
3.5. Накопление ортофосфата 35
3.6. Резервирование фосфата в виде органических соединений 35
Часть 2. Материалы и методы исследования 40
1. Объекты исследования 40
2. Состав сред культивирования 40
3. Подготовка биомассы для анализов 42
4. Разрушение биомассы 42
5. Экстракция фосфорсодержащих фракций из биомассы 44
6. Экстракция полимерного ортофосфата Ms 2+ (ПОм^ 46
7. Осаждение полифосфатов 47
8. Хроматография полифосфатов на бумаге 47
9. Электрофорез полифосфатов в ПААГ 47
10. Очистка полифосфатов от примесей ортофосфата и пирофосфата 48
11. Определение Фосфогидролазных активностей 48
12. Ультратонкие срезы 49
13. Аналитические методы 50
13.1. Определение общего фосфора 50
13.2 Определение ортофосфата 50
13.3. Определение пирофосфата 51
13.4. Определение элементного состава водонерастворимых осадков 52
13.5. Определение белка 52
13.6. Определение ДНК 53
Часть 3. Результаты исследования и их обсуждение 54
3.1. Поглощение фосфата клетками галофильных архей Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum и галотолерантной эубактерии Brevibacterium antiquum 54
3.1.1. Поглощение фосфата галофильными археями Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum 54
3.1.2. Влияние концентрации P, нарост галофильных архей Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum 56
3.1.3. Поглощение Pt галотолерантной эубактерией Brevibacterium antiquum 59
3.1.4. Влияние концентрации P, нарост галотолерантной эубактерии Brevibacterium antiquum в среде с нормальной и
повышенной соленостью 61
3.2. Влияние некоторых эффекторов на процесс поглощения Pi галофильными археями Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum и галотолерантной эубактерией Brevibacterium antiquum 63
3.2.1. Влияние протонофора карбонилцианид - (трифторметокси) фенилгидразон (ФКФ) 63
3.2.2. Влияние М и ЭДТА на поглощение Pi галотолерантной эубактерией Brevibacterium antiquum 66
3.3. Содержания некоторых фосфорных соединений в биомассе галофильных архей Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum и галотолерантной эубактерии Brevibacterium antiquum 73
3.4. Получение водонерастворимого осадка фосфата из биомассы и его анализ 11
3.5. Изменение морфологии клеток галофильных архей Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum и галотолерантной эубактерии Brevibacterium antiquum в процессе накопления Pi 80
3.6. Использование фосфата магния в качестве фосфатного резерва изучаемыми микроорганизмами при росте на Pj-дефицитной среде 88
3.7. ПолиРи некоторые фосфогидролазы у галофильных архей Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum 93
3.7.1. Доказательство наличия полиР 94
3.7.2. Динамика содержания полиР в проиессе роста галофильных архей Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum на средах с различной начальной концентрацией Р, 95
3.7.3. Изменение длины цепи полиР у галофильных архей Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum в процессе роста на среде с начальной концентрацией фосфата 2,3 мМ 99
3.7.4. Влияние начальной концентрации Р, в среде на активность некоторых фосфогидролаз в процессе роста галофильных архей Halobacterium salinarium и Halorubrum distributum 101
3.8. Влияние условий повышеной солености на полиРи экзополифосфатазную активность у галотолерантной эубактерии Brevibacterium antiquum 105
3.8.1. Сравнение содержания различных фракций полиР в процессе роста Brevibacterium antiquum в отсутствии и в присутствии 3MNaCl в среде культивирования 105
3.8.2. Свойства экзополифосфатазы галотолерантной эубактерии Brevibacterium antiquum 108
3.8.3. Влияние условий культивирования на экзополифосфатазную активность галотолерантной эубактерии Brevibacterium antiquum 111
Заключение 115
Выводы 118
Список литературы 119
