Введение
1. CLASS Введени CLASS е
1.1. Актуальность проблемы
1.2. Научная новизна
1.3. Цель работы 8
1.4. Задачи 9
2. Обзор литературы
2.1. Строение молочной железы К)
2.2. Формы рака молочной железы. Классификация И
2.3. Статистика заболеваемости раком молочной железы П
2.4. Возможные механизмы возникновения рака при мутациях в генах опухолевых супрессоров 18
2.5. Тканеспецифичность проявления мутаций в гене BRCA1 20
2.6. Заболевания, связанные с мутациями в генах BRCA1 и BRCA2 22
2.7. Наследственная предрасположенность к раку молочной железы 23
2.8. Структура гена и белка BRCA1 24
2.9. Роль BRCA1 в регуляции транскрипции 30
2.9.1. C-MycuBRCAl 30
2.9.2 CtlP и BRCAI 3J.
2.9.3 RHA и BRCA1 33
2.9.4р53 и BRCA 1 33
2.10. Роль BRCA1 в репарации ДНК 33
2.11. Роль BRCA1 в росте и дифференцировке клеток 36
2.12. Мутации гена BRCA1 37
2.13. Спектр мутаций в гене BRCA1 в разных популяциях 41
3. Материалы и методы
3.1. Пациенты 52
3.2. Выделение ДНК из свежей и замороженной крови по методу Кюнкеля
3.2.1 Выделение ДНК из свежей крови 53
3.2.2 Выделение ДНК из замороженной крови 54
3.3. Электрофорез ДНК в агарозном геле 55
3.4. Полимеразная цепная реакция 56
3.5. Электрофорез ДНК в полиакрил амид ном геле 58
3.6. Электрофорез в ПААГ в денатурирующих условиях 59
3.7. Гетеродуплексный анализ 60
3.8. SSCP-анализ 60
3.9. Окрашивание образцов ДНК 61
3.9.1 Окрашивание бромистым этидием 61
3.9.2 Окрашивание нитратом серебра 6Х
ЗЛО. Клонирование 62
3.10.1 Лигирование 62
3.10.2. Трансформация Е. coli 63
3.10.3. Идентификация рекомбинаитных клонов путем амплификации клонированных последовательностей 65
3.11. Секвенирование ДНК 65
3.12. Статистические методы 66
4. CLASS Результат CLASS ы 68
4.1. Мутация 2963dell0 (c.2963-2972dell0) 70
4.2. Мутация 5382insC (c.5382-5383insC) 79
4.3. Мутация 3819del5 (c.l234-1235del5) 84
4.4. Мутация 3875del4 (c.l252-1253de!4) 92
4.5. Мутация 2274insA (c.720insA) 98
4.6. Мутация R1203X (c.3726C>T) 1Ш
4.7. Мутация E1250K (c.3867G>A) 105
4.8. Полиморфизм S694S (c.2201OT) 110
4.9. Полиморфизм L771L (c.2430T>C) 110
4.10. Полиморфизм El038G (c. 3232A>G) U5
5. Обсуждение результатов
5.1. Введение И8
5.2. Мутация 5382insC -одна из наиболее распространенных в мире 121
5.3. Впервые обнаруженная мутация 2963dell0 124
5.4. Роль мутаций 3819del5 и 3875del4 в развитии предрасположенности к заболеванию 125
5.5. Редкая мутация 2274 ins А 127
5.6. Нонсенс-мутация R1203X 127
5.7. Миссенс-мутация Е1250К —мутация или полиморфизм? 128
5.8. Полиморфизмы E1038G, S694S и L771L 130
5.9. Поиск мутаций в 5 экзоне гена BRCA1 133
5.10. Заключение 134
6. Выводы 139
7. Список литературы 140
