Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Лабораторная диагностика синегнойной инфекции 13
1.2. Применение МкАт для изучения синегнойной палочки и ее обнаружения в различных объектах исследования... 26
Собственные исследования 31
Глава 2. Материалы и методы 31
2.1. Штаммы микроорганизмов, питательные среды 31
2.2. Лабораторные животные 31
2.3. Клеточные линии 32
2.4. Антигены 32
2.5. Схемы иммунизации животных, получение иммунных спленоцитов и антисывороток 34
2.6. Протоколы гибридизации 36
2.7. Отбор антителопродуцирующих гибридом и их клонирование 37
2.8. Накопление, очистка, изотипирование МкАт 38
2.9. Анализ специфичности МкАт 39
2.9.1. Иммуноферментный анализ 39
2.9.2. Иммуноблоттинг 39
2.10. Диагностические препараты 40
2.10.1. Антимышиный ИПК 40
2.10.2. Получение экспериментальных образцов меченых МкАт 40
2.10.3. Приготовление меченых флуорохромом антител на основе поликлональных иммуноглобулинов 41
2.11. Оценка активности и специфичности эксперимен-тальных образцов меченых флуоресцеинизотиоцианатом поли- и моноклональных антител 42
2.12. Оценка активности моноклональных ИПК и их применение в ИФА для выявления антигенов P. aeruginosa 43
2.13. Методы статистической обработки результатов опытов 43
Глава 3. Получение гибридом-продуцентов МкАт к антигенам P.aeruginosa 44
3.1. Оптимизация схем стимуляции В - лимфоцитов 45
3.2. Стабилизация свойств гибридом, условия их сохранения и накопление МкАт in vitro и in vivo 50
Глава 4. Характеристика свойств МкАт к антигенам P. aeruginosa 53
4.1. Специфическая активность МкАт 53
4.2. Иммунохимический анализ 56
Глава 5. Изучение возможности применения МкАт к антигенам синегнойной палочки в качестве основы иммунодиагностических препаратов для ИФлА и ИФА 59
5.1. Получение и оценка свойств иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих моноклональных и поликло-нальных к антигенам P.aeruginosa 59
5.2. ИФА с применением моноклональных антител 65
Глава 6. Перспективы совершенствования лабораторного анализа синегнойной инфекции 72
6.1. Обнаружение P.aeruginosa в пробах из объектов внешней среды стационаров 72
6.2, Идентификация синегнойной палочки, изолирован ной из проб клинического материала 76
6.3. Применение моноклональных иммуноглобулинов в ИФлА для изучения мазков-отпечатков при моделировании экспериментальной синегнойной инфекции 77
Заключение 79
Выводы 88
Список использованных источников 89
