Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ - 8 -
1.1. Влияние переувлажнения почвы на растения - 8 -
1.2. Механизмы адаптации растений к анаэробному стрессу - 12 -
1.2.1. Морфолого-анатомические приспособления растений к анаэробному стрессу - 13 -
1.2.2. Метаболическая адаптация растений к гипоксии и аноксии - 14 -
1.3. Гормональная регуляция при гипоксии и аноксии - 15 -
1.4. Образование активных форм кислорода при анаэробном стрессе- 17 -
1.5. Биотехнологические подходы создания устойчивых к анаэробному стрессу растений - 19
1.5.1. Клеточная селекция - 19 -
1.5.2. Генетическая инженерия - 20 -
1.6. Методы, применяемые при получении трансгенных растений пшеницы - 25 -
1.6.1. Поглощение ДНК протопластами пшеницы - 25 -
1.6.2. Электропорация - 27 -
1.6.3. Баллистическая трансформация пшеницы.;. - 29 -
1.6.4. Агробактериальная трансформация пшеницы - 32 -
1.7. Фитогормоны - 35 -
1.8. Общая характеристика цитокининов - 36 -
1.8.1. История открытия - 37 -
1.8.2. Химическая структура и функции - 38 -
1.8.3. Биосинтез цитокининов - 42 -
1.8.3.1. Прямой путь биосинтеза цитокининов - 42 -
1.8.3.2. Биосинтез цитокининов из тРНК - 45 -
1.8.4. Метаболизм цитокининов в растениях - 47 -
1.8.4.1. Конъюгация цитокининов в растении - 48 -
1.8.4.2. Разрушение цитокининов в растениях - 50 -
1.9. Получение трансгенных растений с геном ipt - 52 -
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ - 55 -
2.1. Растительный материал - 55 -
2.2. Среды для культивирования растений и растительных тканей. . - 56 -
2.3. Получение каллуса и регенерация растений пшеницы - 57 -
2.4. Характеристика вектора для трансформации - 58 -
2.5. Среды и условия для культивирования агробактерии - 58 -
2.6. Методы молекулярной биологии - 59 -
2.6.1. ПЦР-атализ ДНК трансгенных "растений - 59 -
2.6.2. Анализ транскрипции генов методом ОТ-ПЦР - 60 -
2.6.3. Гибридизация ДНК по Саузерну - 60 -
2.7. Определение содержания МДА - 61 -
2.8. Определение активности супероксиддисмутазы - 61 -
2.9. Определение активности каталазы - 62 -
2.10. Статистическая обработка результатов - 62 -
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ - 64 -
3.1. Получение трансгенных растений пшеницы - 64 -
3.1.1. Обоснование выбора экспланта для трансформации - 64 -
3.1.2. Подбор оптимальной концентрации селективного агента - 66 -
3.1.3. Освобождение от бактериальной инфекции - 69 -
3.1.4. Выбор оптимальной схемы агробактериальной трансформации.. - 69 -
3.2. Анализ трансформированных растений - 75 -
3.3. Морфологические особенности трансгенных растений - 80 -
3.4. Изучение наследования встроенных генов - 84 -
3.5. Анализ транскрипции введенных генов - 87 -
3.6. Анализ устойчивости трансгенных растений пшеницы в условиях корневого затопления
3.6.1. Создание условий корневого затопления - 90 -
3.6.2. Анализ воздействия корневого затопления на рост и развитие растений - 91 -
3.6.3. Активность антиоксидантной энзиматической системы в растениях пшеницы в условиях корневого затопления - 96 -
3.7. Изучение морфогенетического потенциала каллусных линий, полученных от трансгенных растений пшеницы с геном ipt - 100 -
ЗАКЛЮЧЕНИЕ - 104 -
ВЫВОДЫ - 106-
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ - 107 -
