Введение
2. Введение 6
2.1. Актуальность темы 6
2.2. Цель и задачи исследования 8
2.3. Научная новизна 9
2.4. Практическая значимость работы 9
2.5. Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту 10
2.6. Апробация работы 10
2.7. Публикации 11
2.8. Объем и структура диссертации 11
2.9. Благодарности 11
3. Обзор литературы... 12
3.1. Бисаитспецифические иммуноглобулины и гибрндомные гибридомы 12
3.2. Применение бисайтспецифнческих антител 15
3.3. Моноклональные антитела в диагностике вирусных болезней 18
3.4. Диагностика КЧС 21
3.5. Применение органических люминофоров в биологии и медицине .26
3.6. Заключение по обзору литературы 30
4. Собственные исследования 31
4.1. Материалы и методы 31
4.1.1. Материалы 31
4.1.2. Методы 36
4.1.2.1. Иммунизация и контроль иммунного ответа у мышей 36
4.1.2.2. Получение и клонирование гибридом 36
4.1.2.3. Изоляция субклонов гибридомных клеток, резистентных к 8-азагуанину и 5-бром-2-дезоксиуридину 37
4.1.2.4. Кариологический анализ гибридомных клеток 37
4.1.2.5. Приготовление культуры клеток мышиных спленоцитарных макрофагов 37
4.1.2.6. Криоконсервирование гибридомных клеток и восстановление их после хранения в замороженном состоянии 38
4.1.2.7. Продукция асцитных жидкостей, содержащих моноклональные антитела 38
4.1.2.8. Double-antigen-вариант иммуноферментного анализа 38
4.1.2.9. Фракционирование иммуноглобулинов методом гельпроникающей хроматографии 39
4.1.2.10. Очистка бисайтспецифических моноклональных антител методом иммуноаффинной хроматографии ...39
4.1.2.11. Электрофорез в ДСН-ПААГ 40
4.1.2.12. Иммуноблотинг 40
4.1.2.13. Иммуноэлектрофорез 43
4.1.2.14. Определение концентрации белка 43
4.1.2.15. Приготовление коньюгатов иммуноглобулинов с пероксидазой43
4.1.2.16. Определение класса и субкласса моноклонального иммуноглобулина 43
4.1.2.17. Методы статистического анализа 44
5.2. Результаты собственных иследований 45
5.2.1. Получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к флуоресцеину 45
5.2.2. Получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к IgG свиньи 47
5.2.2.1. Очистка IgG свиньи 49
5.2.2.2. Иммунизация мышей препаратом IgG свиньи и контроль иммунного ответа 53
5.2.2.3. Видовая специфичность моноклональных антител к IgG свиньи54
5.2.2.4. Диагностическая ценность МКА к IgG свиньи 57
5.2.3. Получение квадром, продуцирующих бисайтспецифические иммуноглобулины к ФИТЦ и IgG свиньи 64
5.2.3.1. Получение субклонов гибридомных клеток с мутантным НАР- фенотипом 65
5.2.3.2. Исследование стабильности HAT -субклонов 67
5.2.3.3. Получение квадром, продуцирующих бисайтспецифические моноклональные иммуноглобулины 68
5.2.3.4. Частичная очистка бисайтспецифических МКА с помощью одноступенчатой иммуноаффинной хроматографии 69
5.2.3.5. Испытание тест-системы иммуноферментного анализа на модели вируса трансмиссивного гастроэнтерита в биологических объектах на основе бисайтспецифических моноклональных иммуноглобулинов 71
6. Обсуждение 73
7. Выводы 78
8. Практические предложения 79
9. Список цитированной литературы
