Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. GFAP - глиофибриллярный кислый протеин 9
1.2 Иммуноферментые системы для количественного определения антигена в биологических жидкостях 27
1.3 Диагнстическая ценность количественного определения GFAP в биологических жидкостях 32
1.4 Заключение 39
Глава 2. Материалы и методы исследования 41
2.1 Методы молекулярной биотехнологии 41
2.1.1 Полимеразная цепная реакция 41
2.1.2 Применение эндонуклеаз рестрикции в технологии рекомбинантных ДНК 46
2.1.3 Плазмидные вектора и лигирование вставки 47
2.1.4 Экспрессия трангенных белков в прокариотической системе 49
2.1.5 Выделение рекомбинантных белков имеющих в своем составе гексагистидиновый мотив 51
2.1.6 Метод аналитического диск-электрофореза в полиакриламидном геле 52
2.2 Иммунохимические методы 54
2.2.1 Метод иммунодиффузионного анализа 54
2.2.2 . Метод иммуноблот анализа 54
2.2.3 Методы иммуноморфологического анализа 56
2.2.4 Метод твердофазного иммуноферментного анализа для количественного определения белков 58
Глава 3. Результаты собственных исследований 63
3.1 Клонирование и экспрессия GFAP в вектор pet28a и экспрессия в штамме DE3-BL21. Иммунохимическая характеристика рекомбинантного GFAP 63
3.2. Получение и иммунохимическая характеристика моно- и поликлональных антител, полученных путем иммунизации рекомбинантным препаратом GFAP 76
3.3. Разработка сэндвич варианта ИФА анализа для количественного определения концентрации GFAP в биологических жидкостях 89
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 95
Глава 5. Выводы 102
Список литературы
