Введение
1. Литературный обзор 10
1.1. Биоматериалы 10
1.1.1. Биоматериалы 10
1.1.2. Общие требования, предъявляемые к биоматериалам 11
1.2. Биоматериалы в лечении спаек 14
1.2.1. Проблема спайкообразования 14
1.2.2. Барьерные материалы и специальные требования, предъявляемые к биоматериалам для предотвращения спайкообразования 17
1.3. Полисахариды пектин и хитозан как основа биоматериалов 22
1.3.1. Структура, физико-химические и биологические свойства пектина и хитозана 22
1.3.2. Биоматериалы на основе хитозана и пектина 26
2. Материалы и методы 35
2.1 Материалы 35
2.2 Получение образцов полисахаридов
2.2.1 Выделение пектина из растительного материала 36
2.2.2 Очистка хитозана переосаждением 36
2.2.3 Химическая деполимеризация хитозана 37
2.2.4 Реацетилирование хитозана 37
2.2.5 Дополнительное дезацетилирование хитозана 37
2.3 Определение физико-химических характеристик полисахаридов 38
2.3.1 Определение физико-химических характеристик пектина 38
2.3.2 Определение физико-химических характеристик хитозана
2.3.2.1 Определение молекулярной массы хитозана методом ВЭЖХ 39
2.3.2.2 Определение молекулярной массы хитозана вискозиметрическим методом 39
2.3.2.3 Определение степени дезацетилирования образцов хитозана 40
2.3.2.4 Определение динамической вязкости образцов хитозана 40
2.4 Получение криогелей на основе пектина и хитозана 40
2.5 Исследование структуры и состава криогелей
2.5.1 ИК-спектроскопия 41
2.5.2 Элементный анализ 41
2.5.3 Исследование морфологии поверхности и внутренней структуры криогелей методом сканирующей электронной микроскопии 41
2.6 Исследование физико-химических свойств криогелей 42
2.6.1 Способность к набуханию криогелей 42
2.6.2 Адгезия криогелей к внутренней поверхности брюшной стенки крыс 42
2.6.3 Определение прочности криогелей 42
2.6.4 Определение модуля упругости криогелей 43
2.6.5 Деградация криогелей in vitro 43
2.7 Исследование биосовместимости криогелей 44
2.7.1 Адсорбция белков сыворотки крови 44
2.7.2 Активация системы комплемента криогелями 44
2.7.3 Адгезия макрофагов к поверхности криогелей 45
2.7.4 Цитотоксичность криогелей
2.7.4.1 Цитотоксичность в отношении фибробластов 45
2.7.4.2 Цитотоксичность в отношении эритроцитов 46
2.8 Исследование противоспаечной активности криогелей 47
2.8.1 Оценка противоспаечной активности криогелей in vivo 47
2.8.2 Гистологический анализ 48
2.8.3 Деградация криогелей in vivo 48
2.9 Статистический анализ 49
3. Результаты и обсуждение 50
3.1. Характеристики полисахаридов, используемых в работе 50
3.2. Получение криогелей на основе пектина и хитозана 53
3.3. Исследование структуры и состава криогелей
3.3.1. ИК-спектроскопия 56
3.3.2. Элементный анализ 57
3.3.3. Морфология поверхности криогелей 58
3.3.4. Внутренняя структура криогелей 59
3.4. Исследование физико-химических свойств криогелей 60
3.4.1. Способность к набуханию криогелей 60
3.4.2. Адгезия криогелей к внутренней поверхности брюшной стенки крыс 62
3.4.3. Прочность криогелей 63
3.4.4. Модуль упругости криогелей 64
3.4.5. Деградация криогелей in vitro
3.4.5.1. Изменения в морфологии криогелей в ходе деградации 66
3.4.5.2. Изменение прочности криогелей при деградации in vitro 68
3.5. Исследование биосовместимости криогелей 69
3.5.1. Адсорбция белков сыворотки крови 69
3.5.2. Активация системы комплемента криогелями 70
3.5.3. Адгезия макрофагов к поверхности криогелей 71
3.5.4. Цитотоксичность криогелей
3.5.4.1. Цитотоксичность в отношении фибробластов 73
3.5.4.2. Цитотоксичность в отношении эритроцитов 74
3.6. Исследование противоспаечной активности криогелей 75
3.6.1. Оценка противоспаечной активности криогелей 75
3.6.2. Гистологический анализ 78
3.6.3. Деградация криогелей in vivo 81
3.6.3.1. Изменение прочности криогелей при деградации in vivo 84
Заключение 86
Выводы 88
Список публикаций по теме диссертации 89
Список используемых сокращений 91
Список литературы 93
