Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Современные методы детекции прионов 10
1.2. Синтетические фрагменты прионных пептидов; методики иммунизации животных 23
1.3. Гибридизация соматических, миеломных и антителпродуцирующих клеток с целью получения моноклональных антител 32
2. Собственные исследования 36
2.1. Материалы и методы 36
2.1.1. Культуры клеток, питательные среды 36
2.1.2. Вирусные штаммы 41
2.1.3. Получение конъюгатов пептидов 43
2.1.4. Лабораторные животные 43
2.1.5. Получение асцитной жидкости 43
2.1.5. Определение титра антител методом ИФА в крови иммунизированных животных и в асците 44
2.1.6. Иммуноцитохимическое исследование клеточных культур на наличие прионов 44
2.1.7. Проведение Вестерн-блота 45
2.1.8. Выявление прионов методом ИФА 51
2.2. Результаты 52
2.2.1. Получение поликлональных антител к синтетическому
пептиду прионного белка. Оценка уровня антител в сыворотке
крови иммунизированных животных в ИФА 52
2.2.2. Иммуноцитохимическое исследование культур клеток, гистосрезов головного мозга и мазков крови 59
2.2.3. Разработка метода выявления прионного протеина в белковом препарате «Бактивин» Вестерн-блот анализом 70
2.2.4. Разработка методов иммуноферментного анализа для выявления прионного протеина 73
2.3. Гибридизация соматических и миеломных клеток с антителпродуцирующими клетками мышей и кроликов, характеристика полученных культур и определение продукции моноклональных антител в культуральнои среде 77
3. Обсуждение 88
4. Выводы 98
5. Практические предложения 99
Список литературы 100
Приложения 119
