Введение
Свойства и функции ЧСА 9
Связывание лигандов
Антиоксидантные свойства ЧСА 23
Энзиматические свойства ЧСА 25
Области и стратегии применения препарата ЧСА 27
Получение рекомбинантного ЧСА в различных системах экспрессии 40
Экспрессия рЧСА в прокариотических системах Escherichia coli и Bacillus subtili 40
Экспрессия рЧСА в дрооїсоїсах Saccharomyces cerevisiae 42
Экспрессия р ЧСА в дрожжах Kluyveromyces lactis 43
Экспрессия рЧСА в метилотрофных дрооїсоїсах Hansenula polymorpha (Pichia angusta) 45
Система экспрессии рекомбинантных белков в метилотрофных дрожжах Pichia pastoris 47
Преимущества системы экспрессии P. pastoris 47
Генетические основы экспрессии белков дрооїсоїсами P. pastoris 48
Экспрессия рекомбинантного ЧСА в дрооїсоїсах P. pastoris 49
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 51
Создание экспрессионного штамма GS115/ЧСА 51
Подбор оптимальных условий аналитической экспрессии 55
Оптимизация экспрессии целевого белка в условиях культивирования в ферментере;. 5б
Создание экспрессионного штамма GS115/ЧСА2 59
Очистка рЧСА из культуральной среды 63
Структурно-функциональные исследования рЧСА 677
Исследования биологической активности препарата рЧСА 74
ВЫВОДЫ 77
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 78
Химические реактивы и сопутствующие материалы 78
Методы работы с бактериями Esherichia coli. 81
Методы работы с дрожжами Pichia pastoris 83
Работа с нуклеиновыми кислотами 86
Хроматографические процедуры 94
Работа с белками 97
Масс-спектрометрический анализ
Эксперименты с участием лабораторных животных Ю4
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 106
