Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 11
1.1 Особенности культивирования и регенерации растений in vitro 11
1.1.1 Культура изолированной ткани картофеля 12
1.1.2 Культура изолированной ткани ячменя 14
1.2 Возможности генной инженерии для совершенствования культур картофеля и ячменя 23
1.2.1 Генная инженерия антиоксидантов 32
1.3 Методы генетической инженерии растений 35
1.3.1 Методы прямого переноса чужеродных генов в растительный геном 36
1.3.2 Agrobacterium-опосредованная трансформация 40
1.4 Подходы к повышению эффективности агробактериальной трансформации 43
ГЛАВА II. Объекты и методы исследования 51
2.1 Объекты исследования 51
2.2 Условия культивирования растений in vitro 52
2.3 Индукция морфогенеза в каллусе ячменя 56
2.4 Гистологическая оценка состояния каллуса 57
2.5 Агробактериальная трансформация растений 58
2.6 Молекулярно-генетический анализ растений-трансформантов для подтверждения их трансгенной природы 63
2.7 Фенотипическая оценка трансгенных растений 65
2.8 Статистическая обработка данных 67
ГЛАВА III. Получение и анализ трансформантов картофеля с гетерологичным геном Fe-SOD1 69
3.1 Получение трансгенных линий картофеля Беллароза с геном Fe-SOD1 70
3.2 Влияние гетерологичного гена Fe-SOD1 на морфометрические и биохимические показатели трансформантов картофеля 72
3.3 Оценка растений-трансформантов в условиях стресса 76
ГЛАВА IV. Подбор методических приемов и способов для повышения регенерационного потенциала ячменя 79
4.1 Изучение особенностей каллусогенеза и морфогенеза (регенерации) у хозяйственно ценных генотипов ячменя 79
4.2 Разработка новых способов индукции морфогенеза в каллусной ткани ячменя 84
4.2.1 Изучение влияния перфторорганических соединений и метилотрофных бактерий на каллусную ткань ячменя 85
4.2.2 Подбор оптимальных условий культивирования каллуса ячменя на средах с добавлением перфтордекалина 97
ГЛАВА V. Агробактериальная трансформация ячменя геном FE-SOD1 103
5.1 Подбор оптимальных концентраций антибиотиков, используемых в протоколе агробактериальной трансформации ячменя 104
5.1.1 Подбор концентрации канамицина для отбора растений трансформантов 104
5.1.2 Подбор концентрации цефотаксима для элиминации агробактерии... 109
5.1.3 Подбор концентрации тиментина для элиминации агробактерии 115
5.2 Сравнительная характеристика эффективности агробактериальной трансформации ячменя в различных реципиентных системах 121
5.3 Изучение первичных трансформантов (Т0) ячменя с гетерологичным геном Fe-SOD1 и их потомства (Т1) 128
Заключение 133
Список сокращений и условных обозначений 139
Список литературы
