Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Организация генома домашней курицы 12
1.1.1. Особенности молекулярной организации генома 12
1.1.2. Особенности кариотипа 13
1.2. Генетические карты хромосом 16
1.3. Физические карты хромосом 18
1.4. Гибридизация ДНК-ДНК in situ как метод прямого физического картирования 19
1.5. Картирование хромосом домашней курицы методом гибридизации ДНК-ДНК in situ 26
1.6. Картирование QTL, влияющих на качество яиц 28
1.7. Геномные библиотеки и их использование для позиционного клонирования 34
ГЛАВА 2. Материал и методы 39
2.1. Материал 39
2.2. Полимеразная цепная реакция 39
2.3. Скринирование геномных библиотек 40
2.3.1. Олигонуклетидное мечение ДНК-зондов 40
2.3.2. Гибридизация меченых ДНК-зондов с геномными клонами 41
2.3.3. Верификация аутентичности ВАС-клонов 41
2.4. Трансформация клеток Е. coli и выделение плазмидной ДНК 42
2.4.1. Трансформация клеток Е. coli 42
2.4.2. Выделение плазмидной ДНК 42
2.4.3. Очистка плазмидной ДНК 43
2.5. Приготовление препаратов митотических хромосом курицы 43
2.6. Мечение ДНК-зондов с помощью ник-трансляции 44
2.7. Преципитация ДЖ-зондов в присутствии конкурирующей ДНК и супрессия неспецифической гибридизации 45
2.8. Флуоресцентная гибридизация ДНК-ДНК in situ 46
2.8.1. Гибридизация меченых ДНК-зондов с ДНК митотических хромосом курицы 46
2.8.2. Детекция гибридизационных сигналов с использованием флуоресцентных красителей 47
2.8.3. Анализ результатов гибридизации 48
ГЛАВА 3. Результаты 50
ГЛАВА 4. Обсуждение 70
4.1. Выявление протяженных геномных клонов, содержащих микросателлитные последовательности ДНК, ограничивающие локусы QTL AW33 и ST53 70
4.2. Установление локализации QTL ST53 и QTL AW33 72
4.3. Выявление критического интервала для ST53 73
4.4. Выявление критического интервала для AW33 75
4.5. Гены-кандидаты для QTL ST53 76
4.6. Гены-кандидаты для QTL AW33 82
4.7. Перспективы и практическое применение результатов исследования QTLST53HAW33 99
Выводы 101
Практические предложения 102
Список литературы
